血小板檢測的影響因素探討

【摘要】  目的  探討影響血液細胞分析儀測定血小板(PLT)的因素，排除假性增高和假性降低情況，及時準確地為臨床提供可靠的診治依據。  方法  使用血液細胞分析儀（Sysmex Kx-21）及目視顯微鏡法同時對160余例血小板數與直方圖不符標本進行計數，對比分析。 結果  血小板聚集、小紅細胞數量、試劑的質量、抗凝劑的種類及比例、標本放置時間和反復混勻次數、血小板體積異常等均可影響血細胞分析儀準確計數PLT。  結論  血液細胞分析儀并不能完全代替顯微鏡計數，對PLT計數與直方圖不符標本，應分析原因，用顯微鏡計數或重新采血。

　　【關鍵詞】  血液細胞分析儀；血小板；直方圖
  
    血小板（PLT）檢測是研究止血與凝血障礙的重要指標之一，也是其他血小板參數可靠性的基礎，其檢測結果的可靠性至關重要。血小板由于體積小，特別是容易發生粘附、聚集和變性破壞，故常難以準確計數。血液細胞分析儀的普及，大大提高了工作效率，但對血小板檢測，其結果往往不很穩定。使用血細胞分析儀檢測血小板的影響因素很多，現探討如下。

　　1  材料與方法

　　1.1  儀器 

　　血液細胞分析儀（Sysmex Kx-21），為日本Sysmex公司產品。

　　1.2  試劑 

　　全部配套試劑和質控液。

　　1.3  檢測方法 

　　對日常標本進行分析，并對其中160余例血小板數量與直方圖不符標本同時進行目視顯微鏡計數。

　　2  結果

　　2.1  正常與異常圖形PLT鏡檢結果 

　　見表1。從表1中可以看出，正常圖形的標本，兩種方法檢測血小板的結果，在統計學上，差異無顯著性。而異常圖形的標本，兩種方法檢測血小板的結果，差異有顯著性。表1  正常與異常圖形PLT鏡檢結果(略)

　　2.2  不同MCV值血細胞分析儀與鏡檢法PLT結果比較 

　　見表2。在MCV＞70fl時，血細胞分析儀法與顯微鏡法相比，差異無顯著性。在MCV＜70fl時，血細胞分析儀法與顯微鏡法相比差異有顯著性。表2  不同MCV值血細胞分析儀與鏡檢法PLT結果的比較(略)

　　3  討論

    采血過程中因操作緩慢、穿刺不順、組織液混入，混勻不及時等均可促成血小板（PLT）聚集，導致計數結果偏低。在PLT直方圖上提示有大顆粒存在，PLT聚集是影響PLT計數的主要原因。對此種情況進行了顯微鏡鏡檢，并與正常圖形進行對比，由表1可看出，此種異常圖形的出現，絕大部分是由PLT聚集所引起，結果極不可靠，須重新采血。

    由于血小板（PLT）和紅細胞（RBC）是在同一個檢測系統中通過顆粒大小來加以鑒別的，大量小紅細胞的存在可引起PLT上限區域的改變。在平均紅細胞容積（MCV）大于70fl時，儀器一般無PLT上限區域干擾報警，血細胞分析儀法與顯微鏡法相比，差異無顯著性。在MCV小于70fl時，儀器往往提示上限區域有干擾，紅細胞直方圖上顯示有小紅細胞存在，如表2所示。研究發現，MCV值越小，小紅細胞數量越多，被記錄的PLT數就越多，血小板計數值就越高，儀器法與鏡檢法相比差異越顯著。此種現象可用流式細胞技術或二維激光散射技術避免［1］。實際工作中采用手工法亦可獲得可靠的血小板計數值。

    血細胞的檢測結果，尤其是血小板（PLT）的結果，直接反映試劑的質量。原則上強調使用與儀器檢測原理相匹配的試劑［2］。溶血劑是血細胞分析儀試劑中的主要試劑，能將紅細胞溶解，并能使白細胞的體積發生規律性變化。理論上講PLT計數時的脈沖大小只與稀釋液的性能和儀器的設置有關，與溶血劑的性能無關。但實際工作發現，若溶血不完全，由于紅細胞碎片沖洗不徹底將引起PLT假性增高。此外，稀釋液的滲透壓、離子強度等亦可影響檢測結果。特別注意的事，試劑應避免污染，否則，雜質微粒會使本底增高，導致最后計數結果偏高。

　　抗凝劑的種類對檢測結果影響較大，國際化學標準化委員會（ICSH）推薦用EDTA二鉀抗凝。另外，血液和抗凝劑比例也會影響檢測質量。血液比例過高時，由于抗凝劑相對不足，血漿中出現微血塊的可能性增加。微凝塊可能堵塞儀器影響檢測結果。如果血少，抗凝劑的濃度增高，血小板會腫脹、崩解、產生正常PLT大小的碎片，從而無法得出正確的結果［3］。

　　齊天蕊等［4］的研究表明，標本放置時間太長，易產生巨大血小板，這種巨大血小板分布于紅細胞直方圖的100～250fl處，引起血小板計數偏低，平均紅細胞容積偏高。此外，全血標本需不斷混勻，2h內完成測定。

　　在正常情況下，血細胞分析儀對血細胞體積的識別有明顯的體積界限：PLT2～30fl。根據Coulter原理，儀器只識別顆粒大小而不能識別顆粒的性質。當其體積異常超過該儀器設定的閾值，往往會造成誤判。從表1來看，大PLT引起儀器計數結果偏低。一般來說，PLT體積異常小的情況極少見，故不作討論。

    此外，在血小板（PLT）體積分布圖上，2～3fl粒子過高時，圖形左移甚至縮窄呈“尖峰”樣，此種情況除血小板體積偏小外，常有紅細胞碎片、冷凝球蛋白、紅細胞夾雜物等引起，一起致計數結果增高［5］。有報道認為，白血病細胞、皮下脂肪滴污染及標本的細菌污染等，亦能引起PLT測定值偏高，有待進一步探討。由此可見，PLT計數是否準確，應結合直方圖進行判斷，必要時進行顯微鏡計數或重新采血。

　　【參考文獻】

　　1  朱忠勇.準確計數血小板方法學研究進展.國外醫學??臨床生物化學與檢驗學分冊，2002，23(3)：131-132.

　　2  朱蕓.不同血液分析儀試劑使用的比較.河北醫藥，2000，22(11)：854-855.

　　3  劉健.抗凝劑對血小板及其參數檢測結果的影響分析.國際醫藥衛生導報，2004；10(8)：64-65.

　　4  齊天蕊.血小板計數誤差與標本放置時間關系的探討.醫學文選，2003，22(4)：532.

　　5  李興武.全自動血細胞分析儀計數血小板影響因素分析及糾正.中國誤診學雜志，2002，2(3)：387-389.