1、問:我用的是Gibco胎牛血清澳洲,56℃30分鐘滅活后出現了白色少量絮狀沉淀,是不是污染?還能不能再用?血清的生產日期是2006年7月(現在是2007年6月11日)。
答:應該問題不大。你可以取少量血清放入培養皿中,37℃過夜培養看看就知道是否污染了。血清中沉淀物的出現有許多種原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。
2、問:我用MTT法測細胞的增殖,用DMSO裂解細胞,發現把DMSO加入到孔中就會形成乳白色(用的含胎牛血清的1640培養基,由于沒有離板子的離心機,所以沒有去除培養基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培養基沒有看到有這種情況。該怎么解決?
答:為什么要用離心機離心呢?難倒你養的是懸浮細胞嗎?如果是貼壁細胞的話直接將MTT倒掉,再加DMSO即可,我們就是這么做的,效果很好!并且測細胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應該很大!有時不一定就是血清的原因,可能跟你的MTT放置的時間或以及其他成分有關!
3、問:(1)GIBCO胎牛血清500ml,今天解凍后沒有混勻直接分裝,結果使得前面的幾管是清亮的,后面就帶有棕色的,不知有沒有影響?估計有什么影響?前面的成分好還是棕色的成分好啊?
答:肯定有。最好還是重新混合重新分裝,我覺得有效成分會集中在棕顏色部分。
問:(2)為什么會出現棕色呢?
答:血清中的棕色多一些可能是因為紅蛋白的含量高些的緣故吧。
問:(3)血清滅活之后可以存放嗎?我的是前天滅活的,但是沒有加到培養基里,而是放在冰箱里,那下次可以直接用嗎?還是再次滅活啊?
答:當然可以,如果多的話,分裝后最好放在-20℃,下次用時再解凍,也不用再滅活。最好用一管拿一管,少許血清可以放在4℃。分裝時還要注意不要裝得太滿,以免溢出污染。
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