血紅蛋白的測定

實驗概要

掌握比色法測定動物的血紅蛋白的含量。

實驗原理

血紅蛋白的顏色常與氧的結合量多少有關。但當用一定的氧化劑將其氧化時，可使其轉變為穩定、棕色的高鐵血紅蛋白，而且顏色與血紅蛋白（或高鐵血紅蛋白）的濃度成正比。可與標準色進行對比，求出血紅蛋白的濃度，即每升血液中含血紅蛋白克數（g?L^-1）。

主要試劑

 1%HCl、蒸鎦水、99%酒精、乙醚、75%酒精.

主要設備

沙里氏血紅蛋白計、小試管、刺血針或注射器，微量采血管，干棉球。

實驗材料

雞。

實驗步驟

1.使用沙里氏血紅蛋白計測定 

沙里氏比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成棕色的高鐵血紅蛋白，然后和標準比色板進行比色。 

（1）沙里血紅蛋白計  

主要具有標準褐色玻璃比色箱和1只方形刻度測定管組成。比色管兩側通常有兩行刻度；一側為血紅蛋白量的絕對值，以g?dl^-1(每100 ml血液中所含血紅蛋白的克數)表示，從2～22 g；另一側為血紅蛋白相對值，以%（即相當于正常平均值的百分數）來表示，從10%～160%。為避免所使用的平均值不一致，因此一般采用絕對值來表示。 

（2）具體測定方法如下： 

　　①用滴管加5～6滴，0.1mol?L^-1 HCl到刻度管內,(約加到管下方刻度”2”或多或10%處)。 

　　②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔細揩去吸管外的血液。 

　　③將吸血管中的血液輕輕吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作時勿產生氣泡,以免影響比色。用細玻棒輕輕攪動，使血液與鹽酸充分混合，靜置10 min，使管內的鹽酸和血紅蛋白完全作用，形成棕色的高鐵血紅蛋白。 

　　④把比色管插入標準比色箱兩色柱中央的空格中。 

　　⑤使無刻度的兩面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管內逐滴加入蒸餾水，并不斷攪勻，邊滴，邊觀察、邊對著自然光進行比色，直到溶液的顏色與標準比色板的顏色一致為止。 

　　⑥讀出管內液體面所在的克數，即是每100 ml血中所含的血紅蛋白的克數。比色前，應將玻棒抽出來，其上面的液體應瀝干凈，讀數應以溶液凹面最低處相一致的刻度為準。換算成每升血液中含血紅蛋白克數（g?L^-1）。

注意事項

1.取血前要做好充分的消毒。 
 　

2.血液要準確吸取20 μl，若有氣泡或血液被吸入采血管的乳膠頭中都應將吸管洗滌干凈，重新吸血。洗滌方法是：先用清水將血跡洗去，然后再依次吸取蒸餾水、99%酒精、乙醚洗滌采血管1～2次，使采血管內干凈、干燥。作為學生練習，微量采血管可反復使用。