西格列汀專利到期，仿制時需關注亞硝胺雜質NTTP

GLP-1類似藥帶火了2型糖尿病治療藥物。除了多肽類藥物之外，小分子化藥也是常用藥物，其中DPP-4（二肽基肽酶-4）抑制劑是治療2型糖尿病的藥物之一。GLP-1是響應食物攝入來增強葡萄糖依賴的胰島素分泌和抑制胰高血糖素。但GLP-1的葡萄糖調節作用是短暫的（半衰期約2分鐘），因為天然的GLP-1可以被DPP-4快速降解。DPP-4抑制劑的作用增加了在體內的GLP-1的循環水平，并保留了GLP-1的降血糖作用，從而改善了血糖控制。

DPP-4抑制劑機理（圖源：見圖中所示）

默沙東研發的西格列汀（Sitagliptin）是第一個DPP-4抑制劑，可單獨應用，或與其他口服降糖藥組成復方藥物治療2型糖尿病。其優點是安全性好，低血糖及體重增加的不良反應發生率低。磷酸西格列汀片是進口產品獨霸市場的典型代表，數據顯示，其在2023年國內公立醫院的銷售額為26.56億元，默沙東占據了99.65%的市場份額。

據了解，默沙東的磷酸西格列汀在國內的化合物專利CN1290848C已于2022年7月4日到期，但其晶型專利CN100430397C，即保護磷酸結晶單水合物的專利有效期至2024年6月18日。

經查詢，國內已有30多家藥企有西格列汀或其復方制劑的仿制藥上市。但是，美國FDA在部分西格列汀制劑中發現亞硝胺雜質（Nitro-STG-19，即NTTP）超標^[1]，加強了對西格列汀的監管。

(圖源：FDA官網，參考資料^[1])

NTTP的化學名為7-亞硝基-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪，屬于NDSRI類亞硝胺雜質,源于西格列汀的部分結構。西格列汀和NTTP的結構如下圖：

A：西格列汀，B：NTTP

島津的應用工程師開發了一種基于三重四極桿型LC-MS/MS的NTTP檢測方法，該方法同時測定西格列汀中多種常見亞硝胺雜質。

01 LC條件

儀器： Nexera XS LC-40

色譜柱：Shim-pack ScepterC18-120(150mmx3.0mmI.D.,1.9μm)

P/N:227-31013-04

柱溫：45℃

流速：0.4mL/min

進樣體積：10μL

流動相：

A相：0.1 %甲酸的水溶液

B相：0.1 %甲酸的甲醇溶液

梯度程序：

02 MS條件

儀器： LCMS-8060NX

離子源： APCI+

MRM參數：

NTTP和9種常見亞硝胺的MRM質量色譜圖如下圖所示，標品溶液濃度為1 ng/mL，相當于樣品中NTTP含量為10 ppb（樣品制備時，等效于100mg西格列汀API于1mL溶液）。

NTTP的終生暴露可接受限度為每天37納克（即AI=37ng/day）^[2]，西格列汀的日服用劑量為100mg,則西格列汀中NTTP的限度為0.37ppm（370ppb）。

(圖源：FDA官網，參考資料^[2])

本實驗中，NTTP的定量下限為0.1 ng/mL，如下圖所示，相當于樣品中NTTP含量為1ppb，滿足監管檢驗檢測要求。

更多信息請參考島津應用報告

Determination of Nitrosamine Impurities and NDSRI in Anti-diabetic Drugs on Shimadzu LCMS-8060NX

https://www.shimadzu.com/an/sites/shimadzu.com.an/files/pim/pim_document_file/applications/application_note/23956/an_04-ad-0301-en.pdf

參考資料

[1] FDA works to avoid shortage of sitagliptin following detection of nitrosamine impurity

https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-works-avoid-shortage-sitagliptin-following-detection-nitrosamine-impurity

[2] CDER Nitrosamine Impurity Acceptable Intake Limits

https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/cder-nitrosamine-impurity-acceptable-intake-limits

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