視界：研究HIV治療過程的單細胞免疫反應

　　Mario Roederer博士的團隊通過研究單細胞來更好地描述在HIV治療過程中免疫系統的特征。該團隊使用非人類靈長目模式動物，用單細胞基因表達分析提高T細胞的鑒定。他們使用了先進的技術，包括18色 FACS系統和Fluidigm BioMark? 系統進行單細胞基因表達分析。基本研究內容包括：

　　成熟中樞免疫系統中各組成部分的角色和相互作用

　　? 發病機理的相關性

　　理解急性感染如何緊隨CD4記憶細胞的大規模感染和破壞而發生。　

　　? 用于疫苗開發的免疫保護相關性

　　研究提前注射疫苗以保護CD4記憶細胞不被破壞，以及淋巴細胞預防病毒擴增的功能。　　

　　? 促進和發展細胞研究技術

　　使用先進的儀器，包括FACS系統和Fluidigm的儀器、試劑、分析和方法。

圖：HIV感染的H9 T細胞；來源：NIAID

　　Roederer博士和他的團隊有一篇方法學論文，題目為：Highly multiplexed quantitation of gene expression on single cells (Journal of Immunological Methods, 2013, 391(1-2):133-145)。

　　“在免疫學領域，極大的細胞異質性已被廣泛認識，但相應的工作還進行的很少。” -Mario Roederer，Ph.D.

　　在這篇文章里，Roederer和他的團隊提出了一種在BioMark平臺使用多重TaqMan試劑對單個T細胞進行分析的方法。首先，使用BD FACSAria?，根據細胞的標記將其分離以得到單細胞。接下來，Roederer細化其方法學，確保獲得足量的RNA以進行單細胞的表達譜分析。Roederer等展示了低至一個mRNA轉錄本的檢測極限（limit of detection, LOD），結果表明BioMark的高靈敏度和寬的動態范圍，可以檢測單細胞當量的mRNA。

　　該團隊在單細胞水平監測了T細胞的激活，發現了群體中CD4+細胞的亞群。實際上，CD4+細胞表達類似CSCR5/CCL5和DPPR/TIA1這樣的基因是稀有事件，并非之前使用大量mRNA觀察到的是普遍事件。

　　通過比較CD154+和CD154 -T細胞對葡萄球菌腸毒素B（SEB, Staphlyococcal enterotoxin B）的反應，（細胞）的異質性被進一步確立。當被刺激時，分析顯示有一組基因和T細胞的激活強烈相關，但是，只有5-20%的T細胞擁有可以結合SEB的受體Vβ鏈變體。

　　在這項研究中，細胞異質性被證明有很強的免疫相關性。Roederer和他的團隊正繼續推進系統的、單細胞的方法以更好地理解中樞免疫系統中細胞和分子的相互作用。