試劑盒酶的底物分類

酶的底物

1.3.3.1 HRP的底物 HRP催化過氧化物的氧化反應，最具代表性的過氧化物為H2O2，其反應式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。

2.在ELISA試劑盒中，DH2一般為無色化合物，經酶作用后成為有色的產品，以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基聯苯(3,3",5,5tetramethylbenzidine, TM和ABTS[2,2"-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

3.OPD氧化后的產品呈橙紅色，用酸中止酶反應后，在492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色便當，是HRP結合物最常用的底物。OPD自身難溶于水，OPD?2HCL為水溶性。曾有報道OPD有致異變性，操作時應予留心。OPD見光易蛻變，與過氧化氫混組成底物運用液后更不安穩，須現裝備現用。在試劑盒中，OPD和H2O2一般分紅二組分，OPD可制成一定量的粉劑或片劑方法，片劑中含有發泡助溶劑，運用更為便當。

4.過氧化氫則配入底物緩沖液中，ELISA試劑盒有制成易保存的濃縮液，運用時用蒸餾水稀釋。先進的ELISA試劑盒中則直接配成含保護劑的作業濃度為0.02% H2O2的運用液,只需參與OPD后即可作為底物運用液。TMB經HRP作用***產品顯藍色，目視對比明顯。

5.TMB性質較安穩，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成運用液，可直接作底物運用。其他，TMB又有無致癌性等利益，因此在ELISA中運用日趨廣泛。酶反應用HCL或H2SO4中止后，TMB產品由藍色呈黃色，可在比色計中定量，最適吸收波長為405nm。

6.ABTS雖不如OPD和TMB靈敏，但空白值極低，也為一些試劑盒所選用。另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，經HRP作用后，產品顯熒光，可用熒光光度計測量。用于ELISA的利益為可加寬定量測定的線性規劃。

7.HRP對氫受體的專一性很高，ELISA試劑盒僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(urea peroxide)。H2O2運用最多，但尿素過氧化物為固體，作為試劑較H2O2便當、安穩。試劑盒供應尿素過氧化物片劑，用蒸餾水溶解后，在底物緩沖液中密閉、低溫（2～8℃）可安穩1年。