質粒DNA的大量提取和純化實驗

細菌

STE 酚 氯仿 NaCl PEG 乙醇

離心管 離心機 抽干機

1、取培養至對數生長后期的含pBS質粒的細菌培養液250 ml，4 ℃下5000 g離心15分鐘,棄上清,將離心管倒置使上清液全部流盡。

2、將細菌沉淀重新懸浮于50 ml用冰預冷的STE中（此步可省略）。

3、同步驟1方法離心以收集細菌細胞。

4、將細菌沉淀物重新懸浮于5 ml溶液I中,充分懸浮菌體細胞。

5、加入12 ml新配制的溶液II, 蓋緊瓶蓋,緩緩地顛倒離心管數次,以充分混勻內容物,冰浴10分鐘。

6、加9 ml用冰預冷的溶液III, 搖動離心管數次以混勻內容物,冰上放置15分鐘,此時應形成白色絮狀沉淀。

7、4 ℃下5000 g離心15分鐘。

8、取上清液,加入50 ml RNA酶A(10 mg/ml), 37 ℃水浴20分鐘。

9、加入等體積的飽和酚/氯仿,振蕩混勻,4 ℃下12000 g離心10分鐘。

10、取上層水相, 加入等體積氯仿,振蕩混勻,4 ℃下12000 g離心10分鐘。

11、取上層水相,加入1/5體積的4mol/L NaCl和10% PEG(分子量6000), 冰上放置60分鐘。

12、4 ℃下12000 g離心15分鐘, 沉淀用數ml 70%冰冷乙醇洗滌，4 ℃下12000 g離心5分鐘。

13、真空抽干沉淀，溶于500 ml TE或水中。