轉基因植株的選擇實驗

實驗材料：幼胚盾片     

試劑、試劑盒：

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4-D                                                               

AgNO3                                                                  

毒莠定                                                                 

特美汀                                                                  

草銨膦                                                                  

玉米素 

儀器、耗材：

誘導培養基                                                                 

再生培養基

實驗步驟：

1. 將可能含有轉化細胞的幼胚盾片置于愈傷誘導培養基上培養產生愈傷組織，誘導培養基中添加 0.5 mg/L 2 ,  4-D 和 10 mg /L AgNO₃。對農桿菌處理過的培養物，培養基中還應加入 2 mg/L 毒莠定和 160 mg/L 特美汀，愈傷組織誘導培養在黑暗條件下進行，同時在這一階段可加入選擇劑 2~6 mg/L 草銨膦。

2. 3 或 4 周后將愈傷組織從誘導培養基轉移至第一輪再生培養基，添加  0.1 mg/L  2 ,4 -D、25 mg/L  CuSO₄ 和 5 mg/L 玉米素，并在持續的光照條件下培養。對農桿菌處理過的培養物，還要加入 160  mg/L 特美汀。可在這一階段加入選擇劑草銨膦 2~6 mg/L。

3. 3 或 4 周后評價再生/選擇反應。再生的愈傷組織轉移至添加了 5 mg/L 玉米素和 2~6 mg/L 選擇劑草銨膦的第二輪再生培養基上繼續培養 3~4 周。將一半非轉基因對照的愈傷組織置于添加有選擇劑的再生培養基上培養，另一半則在無選擇劑的再生培養基上培養，分別作為選擇對照和非選擇對照。



4. 3 或 4 周后評價再生反應和選擇反應。

5. 為確保降低非轉基因細胞（或組織）的混入，只轉移具有健壯綠芽或苗的部分至添加有 4~6 mg/L 草銨膦的再生培養基上，在 Magenta 培養盒（Sigma- Aldrich) 中繼續培養 3~4 周。

6. 一旦再生苗長到 10~15 cm 長并有適當的根系時，就將這些可能的轉基因植株移栽到含有特制土肥的 8 cm 塑料方盆中，并置于轉基因封閉溫室中生長。