轉錄因子活性ELISA是建立在ELISA基礎上的高靈敏度的檢測方法,比EMSA的靈敏度高l0倍,在5h內就能完成。不涉及放射性和凝膠電泳,安全簡便,而且這種微孔板的形式能同時檢測1—96個樣品。ArrayStarTM轉錄因子活性ELISA試劑盒可以快速、靈敏地檢測細胞核提取物中轉錄因子的DNA結合活性。試劑盒采用96微孔板的形式,標記探針是生物素標記的雙鏈寡核甘酸片斷,含有轉錄因子的特異性DNA結合序列。
當標記探針與細胞核抽提物一起孵育時,核抽提物中有活性的轉錄因子與探針特異性結合形成轉錄因子/探針復合物。隨后轉錄因子/探針復合物與鏈親和素包被的微孔板孵育,轉錄因子/探針復合物通過與微孔板上鏈親和素結合,被固定在微孔板上。
洗去未結合物,加入特異性一抗,然后加入HRP標記的二抗及底物,HRP催化底物發生顏色改變。
轉錄因子活性ELISA檢測方法也是利用轉錄因子的DNA結合功能,但與傳統方法不同的是,它是利用抗體進行檢測,不需要使用放射性和電泳,根據顏色的變化,就能夠安全地檢測特定的轉錄因子活性改變。
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