1.取材:根據實驗目的取材,要求部位準確,體積小于2mm3
2.醛類固定:用2%-3%的戊二醛固定2小時
3.清洗:用磷酸緩沖液清洗3次,每次10min
4.鋨酸固定:用1%-2%的鋨酸固定2~3小時
5.清洗:用磷酸緩沖液清洗3次,每次10min
6.脫水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各15min,再用100%乙醇脫水3次,每次30min
7.置換:用環氧丙烷或丙酮置換3次,每次30min
8.浸漬:10hr以上,浸漬過程如下:
①丙酮:包埋劑=3:1的浸漬液浸漬(動物樣品1hr,植物樣品2~3hr)
②丙酮:包埋劑=1:1的浸漬液浸漬(動物樣品1hr,植物樣品2~3hr)
③丙酮:包埋劑=1:3的浸漬液浸漬(動物樣品4hr,植物樣品12~24hr)
④純包埋劑浸漬(動物樣品4hr,植物樣品12~24hr)
9.包埋:將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中;包埋劑配方中Epon812,MNA,DDSA,DMP-30的比例見附表
10. 聚合:將包埋板置于40C、60℃條件下各聚合48hr
11.修塊:將包埋頭修成梯形,且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm
12.超薄切片:切片厚度50-90nm
13.染色: 鈾染色 5~15min清洗
鉛染色 5~10min清洗
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