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  • 發布時間:2016-12-28 14:57 原文鏈接: 透射電鏡樣品超薄切片常規制作規程

      1.取材:根據實驗目的取材,要求部位準確,體積小于2mm3

      2.醛類固定:用2%-3%的戊二醛固定2小時

      3.清洗:用磷酸緩沖液清洗3次,每次10min

      4.鋨酸固定:用1%-2%的鋨酸固定2~3小時

      5.清洗:用磷酸緩沖液清洗3次,每次10min

      6.脫水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各15min,再用100%乙醇脫水3次,每次30min

      7.置換:用環氧丙烷或丙酮置換3次,每次30min

      8.浸漬:10hr以上,浸漬過程如下:

        ①丙酮:包埋劑=3:1的浸漬液浸漬(動物樣品1hr,植物樣品2~3hr)

        ②丙酮:包埋劑=1:1的浸漬液浸漬(動物樣品1hr,植物樣品2~3hr)

        ③丙酮:包埋劑=1:3的浸漬液浸漬(動物樣品4hr,植物樣品12~24hr)

        ④純包埋劑浸漬(動物樣品4hr,植物樣品12~24hr)

      9.包埋:將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中;包埋劑配方中Epon812,MNA,DDSA,DMP-30的比例見附表

      10. 聚合:將包埋板置于40C、60℃條件下各聚合48hr

      11.修塊:將包埋頭修成梯形,且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm

      12.超薄切片:切片厚度50-90nm

      13.染色: 鈾染色 5~15min清洗

            鉛染色 5~10min清洗

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