如果是用自己配置的培養基,如玉米浸提液、麥芽浸提液、麥麩浸提液等等,可以不用換液,采取添料來維持酵母對培養基的營養需要。
用無機鹽進行大規模發酵,更省錢。
大規模發酵時,甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用純氧并不昂貴,在武漢買個鋼瓶600元左右,一瓶純氧20元。一個批次100h左右估計3-4 瓶氧氣。
關于Tryptone和Peptone的選擇:
1)用培養E.coli的Tryptone替代Peptone對有些酵母菌可以,例如一般的表達酵母.但是對有酵母菌些絕對不行.例如做雙雜交的 AH109,Y187之類表達酵母,根本就長不好.
2)Tryptone和Peptone雖然都是營養胨,但營養成分不一樣.即使是一般的表達酵母可以在Tryptone生長,生長狀態也沒有在
Peptone中好.但tryptone和peptone就是含量上有點不同外,其他沒什么區別,用peptone的目的不是為了提供氮源,提供氮源的是培養基里面的YNB。
3)如果要求不高,一般使用也還湊合.盡可能的用Peptone,difco公司的,晶美公司代理的,甚至是其它國產的蛋白胨都可以很正常的培養絕大多數酵母菌.
4)用含Peptone的培養基顏色很深,純化表達蛋白時顏色要去掉,所以還要進行麻煩的后續處理。而改用Tryptone后,培養基顏色變得很淺,和LB(液體)顏色差不多,后續處理要簡單些。invitrogen說明書說
peptone的作用是防止目的蛋白被一些酶類水解,加入peptone的目的就是競爭性抑制目的蛋白的水解,因為peptone是一些小的短肽,是一些酶作用的底物。
培養畢赤酵母,書上說BIOTIN儲液是水溶液,但事實上BIOTIN很難溶于水, 可以稍稍水浴加熱一下。配制500×BIOTIN stock solution(0.02%)有這么3種方案:
1)、懶人是將Biotin直接溶在去離子水中,放過夜,基本就能溶;
2)、急性子是將溶液配成0.02N的NaOH,就很容易溶解了;
3)、水浴加熱,溫度不能高于50度。
D-生物素是具有生物活性的生物素,也就是vitaminH。在畢赤酵母代謝過程中,作為多種酶的輔基起作用。天然培養基中一般可以不單獨添加,因為YNB中、酵母粉、蛋白胨中均含有一定量的生物素,但是做高密度發酵還是必須要添加的。MD、MM屬于基礎培養基,沒有哪種成分會含有微量生長因子(如生物素)。所以肯定要加的。
附:無機培養基配方
BSM無機培養基:
85% H3PO4 26.7ml/L
CaSO4 ·2H2O 0.93g/L
K2SO4 18.2g/L
MgSO4·2H2O 14.9g/L
KOH 4.13g/L
甘油 40g/L
PMT1 4.0ml/L
100%氨水調pH5.0(1瓶50ml加800ul氨水)或10g/L硫酸銨調pH5.0,氨水用于上罐調pH(便宜,方便)。誘導表達前調 pH6.0。pH5.0是為了防止BSM形成磷酸鈣沉淀,pH6.0是表達HSA融合蛋白的最適pH。
BSM高壓滅菌后再加4.0ml/L 過濾除菌的PTM1(微量元素)4.0ml/L 。100%的500ml甲醇加6ml PMT1,用于補加甲醇誘導表達目的融合蛋白。
PMT1(1L)配方:
CuSO4·5H2O 6.0g/L
KI 0.088g/L
MnSO4·H2O 3.0g/L
Na2MoO4·2H2O 0.2g/L
H3BO3 0.02g/L
CoCl2·6H2O 0.5g/L
ZnCl2 20.0g/L
FeSO4·7H2O 65.0g/L
Biotin 0.2g/L
濃H2SO4 5.0ml