醋酸纖維素膜電泳分離鑒定蛋白質實驗

血清蛋白質 蛋白質樣品

巴比妥 蒸餾水 HCl 氨基黑 磺基水楊酸 冰醋酸 醋酸 無水乙醇

電泳儀 電泳槽 培養皿 血色素吸管 鉛筆 尺 玻片 濾紙 鑷子

1.  膜的準備: 將醋酸纖維素膜切成8 cm×2 cm 條塊( 或根據需要決定薄膜大小) , 在薄膜一端1 . 5 cm 處用鉛筆輕輕畫一條線( 點樣處) , 浸入巴比妥緩沖液中至完全浸濕( 大概20 min 左右)。用鑷子取出浸透的薄膜, 夾在兩層濾紙中間, 輕輕按壓,吸去多余的液體。

2.  點樣: 用較尖的血色素吸管或其他點樣管吸取樣品2～3 μl 涂在玻片的一端截面上(玻片寬度應小于膜寬度) , 然后將沾有樣品的玻片截面與膜點樣處輕輕接觸, 樣品即呈一條線“印” 在膜上, 使樣品盡量點得細窄而均勻。

3.  電泳: 已點好樣品的薄膜架在鋪有濾紙橋的電泳槽上,使點樣端靠近陰極, 膜用鑷子輕輕拉平不能貼在槽底。蓋好槽蓋, 通電, 控制電流強度為0 . 7 ～ 0 . 8 mA/ cm 膜寬, 當白蛋白(仔細觀察可見淡黃色) 移動約3 cm 即可切斷電源停止電泳, 一般為40～60 min。

4.  染色和漂洗: 取下膜, 立即浸入染色液中10 min。取出移入2 . 5%醋酸中漂洗脫色, 每隔5 min 換一次漂洗液, 直至膜背景無色為止( 約更換3 次) , 即可觀察到清晰的電泳圖譜。

5.  透明處理: 待漂洗干凈的電泳圖譜完全干燥后( 可用電吹風機吹干) , 浸入透明液中0 . 5 min 后, 立即取出, 平貼在玻璃板上, 完全干燥后即成為透明的薄膜圖譜, 可作掃描或照相。如將該玻板浸入水中, 則膜脫下, 吸干水分, 可長期保存。