重疊延伸PCR技術主要用于獲得其它依靠限制性內切酶消化方法難以得到的產物。可用于：（1）基因的定點突變；（2）融合基因的構建；（3）長片段基因的合成；（4）基因敲除以及目的基因的擴增
| 實驗方法原理 | 重疊延伸PCR技術（gene splicing by overlap extension PCR，簡稱SOE PCR）由于采用具有互補末端的引物，使PCR產物形成了重疊鏈，從而在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸，將不同來源的擴增片段重疊拼接起來。 |
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| 實驗材料 | 基因樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | PCR擴增酶擴增酶BufferdNTP引物 |
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| 儀器、耗材 | PCR儀 |
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| 實驗步驟 | 1. 以引物a/b進行pcr1。
2. 以引物c/d進行pcr2。
3. 引物b/c中引入了需要的限制性位點。
4. 混合二者pcr產物，混合以前最好回收一下。
5. 進行pcr延伸反應，只有右面這個可以延伸。
6. 以延伸反應的產物為模板，以a/d為引物進行pcr。
7. 產物即為所需最終產物。
收起 |
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| 注意事項 | 盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意：
1. 戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；
2. 使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
3. 避免反應液飛濺，打開反應管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
4. 操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的精確度；
5. 最后加入反應模板，加入后蓋緊反應管；
6. 操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協助判斷擴增系統的可信性；
7. 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區；
8. 重復實驗，驗證結果，慎下結論。 |
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