重疊延伸PCR
重疊延伸PCR技術主要用于獲得其它依靠限制性內切酶消化方法難以得到的產物。可用于：（1）基因的定點突變；（2）融合基因的構建；（3）長片段基因的合成；（4）基因敲除以及目的基因的擴增實驗方法原理重疊延伸PCR技術（gene splicing by overlap extension PCR，簡稱SOE PCR）由于采用具有互補末端的引物，使PCR產物形成了重疊鏈，從而在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸，將不同來源的擴增片段重疊拼接起來。實驗材料基因樣品試劑、試劑盒PCR擴增酶擴增酶BufferdNTP引物儀器、耗材PCR儀實驗步驟1. 以引物a/b進行pcr1。2. 以引物c/d進行pcr2。3. 引物b/c中引入了需要的限制性位點。4. 混合二者pcr產物，混合以前最好回收一下。5. 進行pcr延伸反應，只有右面這個可以延伸。6. 以延伸反應的產物為模板，......閱讀全文
重疊延伸PCR
實驗方法原理 此技術利用PCR技術能夠在體外進行有效的基因重組，而且不需要內切酶消化和連接酶處理，可利用這一技術很快獲得其它依靠限制性內切酶消化的方法難以得到的產物。重疊延伸PCR技術成功的關鍵是重疊互補引物的設計。重疊延伸PCR在基因的定點突變、融合基因的構建、長片段基因的合成、基因敲除以及目的基
重疊延伸PCR
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 重疊延伸PCR技術（gene splicing by overlap extension PCR，簡稱SOE PCR）由于采用具有
重疊延伸PCR
重疊延伸PCR技術主要用于獲得其它依靠限制性內切酶消化方法難以得到的產物。可用于：（1）基因的定點突變；（2）融合基因的構建；（3）長片段基因的合成；（4）基因敲除以及目的基因的擴增實驗方法原理重疊延伸PCR技術（gene splicing by overlap extension PCR，簡稱SO
重疊延伸PCR簡介
重疊延伸PCR技術(gene splicing by overlap extension PCR,簡稱SOE PCR)由于采用具有互補末端的引物,使PCR產物形成了重疊鏈,從而在隨后的擴增反應中通過重疊鏈的延伸,將不同來源的擴增片段重疊拼接起來.此技術利用PCR技術能夠在體外進行有效的基因重組,而且
通過重疊延伸和基因－SOEing－進行－PCR－突變實驗
試劑、試劑盒 無菌 H2OPCR 緩沖液限制性酶和緩沖液Taq DNA 聚合酶PCR 模板5'和 3'引物dNTP儀器、耗材 DNA 測序裝置熱循環儀瓊脂糖凝膠電泳設備實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑無菌 H2O2. 酶和酶緩沖液10XPCR 緩沖液（Roche)，包含 1
通過重疊延伸和基因－SOEing－進行－PCR－突變實驗
通過重疊延伸和基因 SOEing 進行 PCR 突變實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 無菌 H2O PCR 緩沖液
通過重疊延伸和基因－SOEing－進行－PCR－突變實驗
本實驗介紹關于通過重疊延伸和基因 SOEing 進行 PCR 突變的過程。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒無菌 H2OPCR 緩沖液限制性酶和緩沖液Taq DNA 聚合酶PCR 模板5'和 3'引物dNTP儀器、耗材DNA 測序裝置熱循環儀瓊
重疊PCR—overlap－PCR
1、簡介?重疊PCR也是基本的PCR原理：變性-退火-延伸。不同的是在重疊PCR過程是兩個或者幾個片段重疊延伸之后，再進行指數擴增的PCR過程。 ?2、基本原理*步：PCR產生兩個或者幾個片段，這幾個片段之間必須有重疊區。?第二步：以兩個片段為例，見上圖，*步產生的兩個片段，A D鏈之間有互補，B
重疊延伸產生特異位點誘變實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 擴增緩沖液 熱穩定 DNA 聚合酶 瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠 寡核苷酸引物 模板 DNA
重疊延伸產生特異位點誘變實驗
試劑、試劑盒 擴增緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠寡核苷酸引物模板 DNA儀器、耗材 帶屏障裝置的自動移液器吸頭微型離心管酶可調式移液器可按所需擴增條件設定程序的熱循環儀實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液的成分及所需試劑請見附錄 1。將貯存液稀釋釋到適當的濃度。10x 擴
重疊延伸產生特異位點誘變實驗
重疊延伸法進行特異位點誘變需要四種引物（請見圖 13-4)(Higuchi et al.1988, Hetal.1989)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒擴增緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠寡核苷酸引物模
Overlap－PCR（重疊PCR）的基本原理
Overlap?PCR（重疊PCR）重疊PCR的應用是非常廣泛的，他的原理其實很簡單：比如說有兩個基因或者說一個啟動子和一個基因，你要將他們連接到一 起，我們首先想到的方法當然是借助于酶切的方法，但有時我們并不一定能構找到合適的酶切位點，或者說我們找到了酶切位點，但這種酶非常特殊或者又很貴，我 們可
剪接重疊延伸聚合酶鏈反應的原理和應用特點
中文名稱剪接重疊延伸聚合酶鏈反應英文名稱splicing overlapping extension PCR;SOE-PCR定 義利用一系列聚合酶鏈反應，使產物兩端彼此重疊，以便剪接成長片段，其間越過某段序列可使之缺失的PCR方法。一些基因工程抗體就是用此法制備的。應用學科生物化學與分子生物學（一
PCR中子鏈延伸階段需要的酶是
DNA聚合酶（常用TaqDNA聚合酶，高保真的pfu等）DNA聚合酶的作用是以一條DNA單鏈為模板，將三磷酸脫氧核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成為與單鏈互補的另一條單鏈。
簡述逆轉錄PCR的延伸時間原因
用PCR儀擴增時，變性-退火-延伸循環完成后，繼續72度延伸了10分鐘的原因： 1、延伸時間取決于待擴增DNA片段的長度，當然是在反應體系一定的條件下。例如，使用TaqDNA聚合酶，72度時的堿基摻入率為35-100bp/s，因此延伸速率為1kb/min。 2、根據延伸速率推得，擴增1kb以
PCR延伸時間不夠或者過長會怎么樣
除非你特意設置非常短的時間，一般時間都是夠得，Taq酶每分鐘可以延伸1000bp。如果時間太短的話，擴不出目的條帶，導致電泳圖譜一片糊而沒有主帶；擴增時間過長的話會增加非特異性擴增的可能性，因為更遠位置的非特異性結合位點也有足夠的延伸時間。
重疊基因的特點
所謂重疊基因（overlapping gene）是指兩個或兩個以上的基因共有一段DNA序列，或是指一段DNA序列成為兩個或兩個以上基因的組成部分。重疊基因有多種重疊方式。例如，大基因內包含小基因；前后兩個基因首尾重疊一個或兩個核苷酸；幾個基因的重疊，幾個基因有一段核苷酸序列重疊在一起，等等。重疊基因
基因重疊的概念
基因重疊指同一 DNA 序列可以得到不同的mRNA,從而編碼多種具有重疊序列的蛋白質的基因(核苷酸)。在病毒基因組比較明顯的重疊基因,在其他 生物細胞中則僅見于線粒體和質粒DNA, 這種結構使較小的基因組能夠攜帶較多的遺 傳信息。
重疊感染的概念
抗廣譜抗生素長期使用，使敏感菌受到抑制，不敏感菌（如真菌等）趁機在體內繁殖生長，造成二重感染，又稱菌群交替癥。合并應用腎上腺皮質激素，抗代謝或抗腫瘤藥物更易引發二重感染。
引物延伸實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 RNA 試劑、試劑盒 T4多核苷酸激酶 dATP 醋酸鈉 乙醇
引物延伸實驗
引物延伸分析用于確定位置和定量特定RNA的5'-端的數量。結束標記的寡核苷酸雜交，RNA和利用中存在的脫氧核苷酸逆轉錄作為底漆。因此RNA的反轉錄成cDNA，變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析。cDNA的長度反映了基地之間的標記引物和RNA的5'-端核苷酸的數量，基因產品的數量是針對性的RN
引物延伸反應
Primer extension analysis is used to determine the location and quantitate the amount of the 5′-end of specific RNAs. An end-labeled oligonucleotide i
引物延伸實驗
實驗材料 RNA試劑、試劑盒 T4多核苷酸激酶dATP醋酸鈉乙醇EDTARNaseA苯酚氯仿儀器、耗材 恒溫培養箱NAP-5柱-70°C冰箱低溫離心機實驗步驟 1. ?依次加入下列試劑，建立用以標記引物的反應混合液（終體積10 μl）（1）2.5 μl ?H2O（2）1 μl ?10×T4多核苷酸激
PCR技術盤點
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性，模板DNA與引物的退火(復性)，引物的延伸。重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鐘， 2～3小
PCR技術盤點
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性，模板DNA與引物的退火(復性)，引物的延伸。重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鐘，2～3小時就能
重疊基因的調控序列
①在5′端轉錄起始點上游約20～30個核苷酸的地方，有TATA框(TATA box)。TATA框是一個短的核苷酸序列，其堿基順序為TATAATAAT。TATA框是啟動子中的一個順序，它是RNA聚合酶的重要的接觸點，它能夠使酶準確地識別轉錄的起始點并開始轉錄。當TATA框中的堿基順序有所改變時，mRN
重疊感染的癥狀原由
抗菌藥物的使用可致菌群改變，使耐該種抗菌藥物的微生物引發新的感染。引起新感染的細菌可以是在正常情況下對身體無害的寄生菌，由于菌群改變，其他能抑制該菌生長的無害菌為藥物所抑殺后轉變為致病性菌，或者也可以是原發感染菌的耐藥菌株。但是，當長期、大量使用廣譜抗菌藥物時，情況就發生了根本的改變：使原本并不致病
重疊感染的感染特點
抗廣譜抗生素長期使用，使敏感菌受到抑制，不敏感菌（如真菌等）趁機在體內繁殖生長，造成二重感染，又稱菌群交替癥。合并應用腎上腺皮質激素，抗代謝或抗腫瘤藥物更易引發二重感染。
關于重疊基因的簡介
所謂重疊基因（overlapping gene）是指兩個或兩個以上的基因共有一段DNA序列，或是指一段DNA序列成為兩個或兩個以上基因的組成部分。重疊基因有多種重疊方式。例如，大基因內包含小基因；前后兩個基因首尾重疊一個或兩個核苷酸；幾個基因的重疊，幾個基因有一段核苷酸序列重疊在一起，等等。重疊
重疊群的定義
重疊群（contig）：彼此可以通過末端的重疊序列相互連接形成連續的DNA長片段的一組克隆。