高效毛細管電泳分離模式

　　分離類型

　　八種分離類型,介紹常用的幾種;

　　根據試樣性質不同,采用不同的分離類型;

　　每種機理的選擇性不同;

　　一,毛細管區帶電泳

　　capillary zone electrophoresis ,CZE

　　帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和.

　　正離子:兩種效應的運動方向一致,在負極最先流出;

　　中性粒子:無電泳現象,受電滲流影響,在陽離子后流出;

　　陰離子:兩種效應的運動方向相反;ν電滲流 >ν電泳時,陰離子在負極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離.

　　最基本,應用廣的分離模式;

　　二,毛細管凝膠電泳

　　capillary gel electrophoresis ,CGE

　　將聚丙烯酰胺等在毛細管柱內交聯生成凝膠.

　　其具有多孔性,類似分子篩的作用,試樣分子按大小分離.能夠有效減小組分擴散,所得峰型尖銳,分離效率高.

　　蛋白質,DNA等的電荷/質量比與分子大小無關,CZE模式很難分離,采用CGE能獲得良好分離,DAN排序的重要手段.

　　特點:抗對流性好,散熱性好,分離度極高.

　　無膠篩分技術:采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯聚丙烯酰胺.柱便宜,易制備.

　　三, 膠束電動毛細管色譜(MECC ,MEKC)

　　micellar electrokinetic capillary chromatography,MEKC

　　1.緩沖溶液中加入離子型表面活性劑,其濃度達到臨界濃度,形成一疏水內核,外部帶負電的膠束.

　　在電場力的作用下,膠束在柱中移動.

　　2. 電泳流和電滲流的方向相反,且ν電滲流 > ν電泳 ,負電膠束以較慢的速度向負極移動;

　　5. 色譜與電泳分離模式的結合.

　　3.中性分子在膠束相和溶液(水相)間分配,疏水性強的組分與膠束結合的較牢,流出時間長;

　　4.可用來分離中性物質,擴展了高效毛細管電泳的應用范圍;

　　四,毛細管等電聚焦

　　capillary isoelectric focusing,CIEF

　　1. 根據等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術;

　　2. 毛細管內充有兩性電解質(合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物),當施加直流電壓(6～8V)時,管內將建立一個由陽極到陰極逐步升高的 pH梯度;

　　3. 氨基酸,蛋白質,多肽等的所帶電荷與溶液pH有關,在酸性溶液中帶正電荷,反之帶負電荷.在其等電點時,呈電中性,淌度為零;

　　4. 聚焦:具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移,分別到達滿足其等電點pH的位置時,呈電中性,停止移動,形成窄溶質帶而相互分離;

　　5. 陽極端裝稀磷酸溶液,陰極端裝稀NaOH溶液;

　　6. 加壓將毛細管內分離后的溶液推出經過檢測器檢測;

　　7. 電滲流在CIEF中不利,應消除或減小.

　　五,毛細管等速電泳

　　capillary isotachophoresis ,CITP

　　1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導離子(充滿毛細管)和尾隨離子,試樣離子的淌度全部位于兩者之間,并以同一速度移動.

　　2. 負離子分析時,前導電解質的淌度大于試樣中所有負離子的.所有試樣都按前導離子的速度等速向陽極前進,逐漸形成各自獨立的區帶而分離.陰極進樣,陽極檢測.

　　capillary isotachophoresis ,CITP

　　3. 不同離子的淌度不同,所形成區帶的電場強度不同(ν=μE),淌度大的離子區帶電場強度小;

　　沿出口到進口,將不同區帶依次排序1,2,3,4 電場強度依次增大.假設"2"號中離子擴散到"3"號,該區電場強度大,離子被加速,返回到"2"區;當"2"號中離子跑到"1"號區,離子被減速使之歸隊;

　　4. 特點:界面明顯,富集,濃縮作用;

　　六,毛細管電滲色譜

　　capillary electroosmostic chromatography ,CEC

　　在毛細管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液,以電滲流為流動相,試樣組分在兩相間的分配為分離機理的電動色譜過程;