高效液相色譜柱按色譜固定相基質的分類

   高效液相色譜柱的空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。柱接頭采用低死體積結構，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸內螺紋，另一端是3/16英寸的內螺紋(國內外已規范化)。7/16英寸內螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓環用于密封。3/16英寸的內螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。

    高效液相色譜柱在兩端柱接頭內，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網)，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316L不銹鋼材質，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。

    高效液相色譜柱按色譜固定相基質的分類：

    一.硅膠基質：

    1.反相色譜柱：

    反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。

    反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。

    樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合zui先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

    常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。

    2.正相色譜：

    正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團，如胺基團（NH2,APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。

    由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團的極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小，即極性強弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。

    正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene  Chloride）等。

    3.離子交換色譜柱：以磺化交聯強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱，常用規格：強陰離子色譜柱（SAX），強陽離子交換色譜柱（SCX）

    二 .聚合物基質：

    聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。

    三.其他無機填料：

    其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質，一般僅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強，石墨化碳可用于分離某些幾何導構體，又由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，

    氧化鋁微粒剛性強，可制成穩定的色譜柱柱床，其優點是可在PH高達12的流動相中使用。

    但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用PH范圍1～14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行中。