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  • 發布時間:2019-09-11 09:46 原文鏈接: AACTvs.SILAC:技術原創之爭

      從原創文獻追溯,AACT/SILAC技術的原創者應該是陳先教授(Xian Chen, Department of Biochemistry and Biophysics, University of North Carolina at Chapel Hill)。2000年,陳先教授在《Analytical Chemistry》發表了利用穩定同位素標記的氨基酸標記細胞(E.Coli),并利用質譜實現對蛋白質的相對定量的原創文獻(Anal Chem 2000, 72(6):1134-1143)。遺憾的是,文章中沒有給出一個正式的命名,也沒有申請ZL。直到2006年才申請ZL(Amino Acid-coded Mass Tagging for proteomics (2006) US patent No.7,125,685),技術命名為AACT(Amino Acid-coded Mass Tagging)。陳先教授是2003年“長江學者”,復旦大學的講座教授。其研究團隊是國內最早開展利用AACT/SILAC技術解析生物學問題的課題組,研究方向集中在免疫和腫瘤的細胞蛋白質差異組、蛋白質相互作用、蛋白質翻譯后修飾等方面。

      2002年,Matthias Mann在《Molecular & Cellular Proteomics》發表了文章(Mol Cell Proteomics 2002, 1(5):376-386),利用穩定同位素標記的氨基酸培養哺乳動物細胞,并利用質譜完成對蛋白質的相對定量。該文章給出一個響亮的命名—SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)。盡管AACT和SILAC所用的材料對象不同,但其技術原理是完全一樣的。

      從發表文章的時間上看,Xian Chen要比Matthias Mann早2年!當然,Matthias Mann的技術團隊非常厲害,在幾年時間內,其利用SILAC技術發表了幾百篇文章,覆蓋了從頂級的CNS(Cell、Nature、Science)到影響因子2-3分的學術雜志,使得SILAC的名稱被學術圈廣泛接受。

      與其他體外(in vitro)蛋白質/肽段標記技術相比,AACT/SILAC是一種體內(in vivo)蛋白質代謝標記技術,其顯著的優勢體現在:(1)從實驗的最源頭引入了質量標簽(Mass tag),系統誤差小,定量準確度極高。(2)后續樣品制備流程更為簡單。(3)SILAC技術同樣可以擴展運用到模式生物(SILAM:小鼠、果蠅、線蟲、大腸桿菌等)和人體組織樣品上(super-SILAC)。(4)將SILAC技術和IP-MS結合,通過MS定量,能直接將特異性相互作用蛋白從眾多的非特異性背景蛋白中區分出來,從而快速鎖定互作目標,顯著提供后續IP-WB驗證的成功率。(5)將SILAC技術和IP、pull-down等方法結合,高通量定量分析蛋白質與DNA的互作、蛋白質與RNA的互作以及蛋白質翻譯后修飾等分析。

       上海普賽生物科技有限公司的創始人之一—唐思偉博士,師從陳先教授,利用AACT/SILAC技術進行蛋白質互作、翻譯后修飾、細胞差異組等研究內容。因此,普賽生物在SILAC技術及其運用中具有深厚的技術和學術積累,是業內真正權威的SILAC技術服務商。

      AACT原創文獻:

      Chen X, Smith LM, Bradbury EM: Site-specific mass tagging with stable isotopes in proteins for accurate and efficient protein identification. Anal Chem 2000, 72(6):1134-1143.

      Xian Chen lab:

      http://www.med.unc.edu/biochem/chenlab/chens-biography

      SILAC原創文獻:

      Ong SE, Blagoev B, Kratchmarova I, Kristensen DB, Steen H, Pandey A, Mann M*: Stable isotope labeling by amino acids in cell culture, SILAC, as a simple and accurate approach to expression proteomics. Mol Cell Proteomics 2002, 1(5):376-386.

      Matthias Mann Lab:

      http://www.biochem.mpg.de/en/rd/mann

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