Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法

Bradford蛋白濃度測定試劑盒使用方法:

        1、 取1ml蛋白標準配置液加入到25mgBSA的蛋白標準管中，完全溶解蛋白標準品，即為25mg/ml的蛋白標準溶液。配制成的蛋白標準溶液                可-20℃長期保存。

        2、 取適量25mg/ml蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標準品與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見，通常使用                0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。

        3、 做標準曲線。將標準品按0，1，2，4，8，12，16，20ul加到96孔板中，不足20ul的加標準品稀釋液補足到20ul。

        4、 將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度，加到96孔板中，使待測樣品總體積也為20ul。

        5、 每孔加入考馬斯亮藍G250溶液200ul，充分混勻（可將酶標板放在振蕩器上振蕩30s），室溫放置3-5min后，以標準曲線0號做參比，在                 595nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。以標準品蛋白含量（ug）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。

        6、 如用分光光度計測定，請在第三步的時候將標準品體積改為1ml，濃度梯度用生理鹽水稀釋為0，1，2，5，10，15，30ug/ml。或根據樣                品調整濃度梯度。

        7、 將樣品稀釋至合適濃度，加到小試管中，使待測樣品總體積也為1ml。

        8、 每只試管加考馬斯亮藍G250溶液3ml，充分混勻，室溫放置3-5min后，以標準曲線0號做參比，在 595nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。