CarlJune團隊：非病毒RNA轉導的CART19細胞治療復發

　　目前，CAR-T細胞療法正在針對多種惡性血液腫瘤進行臨床研究，其中包括經典型霍奇金淋巴瘤(cHL)。但由于cHL在免疫抑制腫瘤微環境(TME)中缺乏HRS細胞的獨特生物學特性，使得直接針對HRS表達抗原的細胞治療面臨著很大的挑戰。

　　從左到右依次為：Bruce Levine, David Porter, Carl June 以及 Stephen Schuster博士(圖片來源 賓大)

　　對此，來自賓大Carl June團隊的研究人員假設，使用以CD19為靶點的CAR-T細胞(CART19)，能夠清除TME內的CD19+ B細胞和推定的循環CD19+ HRS克隆型細胞，可間接影響不表達CD19的HRS細胞。

　　在這里，該研究團隊描述了其使用CART19治療復發和難治性cHL患者的先導試驗。為了限制潛在的毒性，研究人員使用了非病毒RNA基因遞送的CART19細胞。與通過病毒載體轉導產生的CART19細胞在體內擴增并保留CAR表達不同，這種非病毒RNA基因遞送的CART19僅在幾天內表達CAR蛋白。

　　5名入組患者(圖片來源 blood)

　　試驗過程中，所有5名入組患者均成功制造了非病毒RNA CART19，但由于新診斷出的骨髓增生異常綜合征，患者＃3在CART19輸注前退出了該項臨床研究。另外4名患者回輸了方案指定的CART19細胞劑量并且可評估。這是第一個使用非病毒RNA基因遞送的CART19臨床試驗：NCT02277522(成人)和NCT02624258(兒童)。

　　旨在評估CART19細胞輸注對復發/難治性HL缺乏治愈性治療方案的患者的可行性，安全性和有效性。

　　臨床研究圖解(圖片來源 blood)

　　研究人員在每次輸注CART19之前和之后2小時以及第21天和第28天收集患者的血液樣品。并使用半定量RT-PCR測量CART19 RNA水平。

　　結果表明：在所有輸注后樣品的80％和20％的輸注前樣品中檢測到CART19 RNA。 在第21天或第28天沒有檢測到CART19 RNA。這與非病毒CART19細胞的瞬時性質一致。治療耐受性良好，沒有患者經歷嚴重毒性。

　　臨床結果(圖片來源 blood)

　　在1個月的反應評估中，患者＃4獲得了完全緩解(CR)，患者＃5獲得了部分緩解(PR)，患者＃2疾病穩定(SD)，患者＃1經歷了疾病進展(PD)。

　　患者＃5在CART19輸注后達到PR后，繼續接受了抗PD-1抗體治療，隨后進行自體SCT，目前處于CR狀態。

　　患者CART19 RNA水平(圖片來源 blood)

　　之后，研究人員比較了患者CART19 RNA水平和持久性之間的關系，其中經歷PD的患者＃1具有最低的CART19 RNA水平，并且在任何輸注前樣品中沒有CART19 RNA持久性的證據。達到CR的患者＃4在5個輸注前樣本中的3個中檢測到CART19 RNA，表明CART19的持續時間較長可能與治療響應有關。

　　就目前的現狀來看，與非霍奇金淋巴瘤相比，cHL的細胞療法進展較慢。雖然靶向HRS細胞上的CD30或EBV蛋白的細胞療法在小型研究中表現出了臨床反應。但TME(腫瘤免疫微環境)的免疫抑制性質，包括PD-L1/2和PD-1的相互作用，可能會對直接針對HRS的治療有所挑戰。因此，該研究團隊推斷，通過間接針對HRS，可以克服這些問題。

　　雖然HRS細胞被認為是CD19陰性，但在HRS腫瘤微環境中的循環CD19陽性克隆HRS前體細胞和CD19陽性反應性細胞預示了HL中CART19作為潛在的治療靶標。

　　而且使用CART19靶向CD19可能有潛在的優勢，可以影響范圍更廣的B細胞，并在涉及的淋巴結內產生局部細胞因子釋放。但是很難解釋因為這些可能不足以反映TME內部的變化以及研究的少量患者。有趣的是，CART19治療似乎還在一些多發性骨髓瘤患者中具有活性，這是另一種B細胞來源的CD19陰性惡性腫瘤。

　　最終，具有雙重靶向(例如CD30和CD19)，PD-1缺陷的CAR細胞或將CAR細胞與免疫檢查點抑制劑組合的研究可能是治療cHL中的有趣策略。

　　綜上所述，Carl June團隊的初步研究表明， 使用非病毒、RNA電穿孔、瞬時表達的CART19細胞靶向CD19陽性細胞是復發/難治性HL患者的可行且安全的策略。一些患者在輸注后，至少48小時內，能夠在外周血中檢測到CART19 RNA，但在7天后就檢測不到了。雖然不可能從這個有限的患者樣本中得出關于臨床活動的任何確切結論，但這種治療似乎是安全的并且能產生一些短暫的反應。

　　基于這些發現，研究人員正在設計一種慢病毒轉導的CART19試驗，該試驗能夠為復發/難治性cHL患者提供更大的體內擴增和更長的持久性。后續研究中，該團隊還計劃開展利用病毒轉導的CART19細胞與PD-1抗體聯合治療HL患者的臨床研究。