2.CIK 培養用細胞因子和抗體：
CD3 激發型單抗：
T
細胞活化的第一信號來自于 T 細胞表面的受體，即 T 細胞抗原受體 （T cell antigen receptor, TCR） 與 APC
提呈的抗原的特異性結合，也就是 T 細胞對抗原的特異性識別。 TCR 是由 2 條不同肽鏈構成的異二聚體，在 T 細胞表面，其與 CD3
分子通過非共價鍵 結合，形成 TCR/CD3 復合體。TCR 識別特異性抗原后會引起 CD3 和 T 細胞表面的輔助 受體 CD4 或 CD8
分子的胞漿尾部聚集，進而激活與胞漿尾部相連的酪氨酸激酶 （Lck, Fyn 和 ZAP-70 等），促使 CD3
分子胞漿區的免疫受體酪氨酸活化基序 （immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM）
中的酪氨酸 （Y） 磷酸化。磷酸化的酪氨酸 （pY） 進一步 磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，從而引起激酶活化的級聯反應 （磷脂酰肌醇途徑或 MAP
激 酶途徑等），最終通過激活轉錄因子，使其進入細胞核內，結合于調控 T 細胞增殖和活化的靶基因 （如 IL-2 和 IFN-γ
等），引起基因的表達和轉錄，T 細胞因而由靜止狀態轉為 增殖和活化狀態。
由上可見，CD3
分子在 T 細胞活化信號的轉導中起著極其關鍵的作用。CD3 激發 型單抗與 T 細胞表面 CD3 分子特異性結合后，可引起 CD3 分子胞漿區
ITAM 基序中酪 氨酸的磷酸化，進而導致 T 細胞增殖和活化的下游信號的激活，從而使 T 細胞增殖和活 化。也就是說，CD3
激發型單抗能夠模擬抗原與 TCR/CD3 復合物的識別和激活過程， 從而引起 T 細胞的增殖與活化，因此是 CIK
細胞培養中不可或缺的刺激因素。
此外，CD3
激發型單抗在選用時一定要注意克隆號。研究表明，僅克隆號為 OKT-3 的 CD3 激發型單抗可以刺激所有人的 T 細胞的增殖，而其它克隆號的
CD3 激發型單抗 僅能刺激一部分人的 T 細胞。因此，在進行 CIK 培養時，最好選用 OKT-3 克隆，以保 證每個患者的 T
細胞均能被激活。
IL-2 （白細胞介素-2）
IL-2
最初發現時被稱為 T 細胞生長因子 （T cell growth factor, TCGF），是引起 T 細胞 增殖最重要的細胞因子。IL-2
既是自分泌細胞因子，也是旁分泌細胞因子，其通過與 T 細胞表面的 IL-2 受體 （IL-2R） 的特異性結合而促使 T
細胞活化，并進入細胞分裂狀態。
此外，IL-2 還可刺激 NK 細胞的生長并增強其殺傷能力。因此 CIK 細胞培養中須添加IL-2,以促進 T 細胞的增殖與活化。
IFN-γ （干擾素-γ）
IFN-γ
具有上調外周血淋巴細胞表面 IL-2R 表達的作用，因此會增強 T 細胞對 IL-2 促 增殖反應的敏感度和強度。在誘導 CIK
細胞形成的過程中加入 IFN- g ,可降低 IL-2 的用量。 研究發現，IFN-γ加入的順序與 CIK 的細胞毒活性密切相關。先加入
IFN- g,培養24后再 加入 IL-2,可明顯提高 CIK 的細胞毒活性。
IL-1α（白細胞介素-1α）
IL-1α也可以介導外周血淋巴細胞表面上調表達 IL-2R.當 IL-1α與 IFN-γ和激發型CD3 單抗合用時，可以明顯提高 CIK 的細胞毒作用。
【細胞制備】
1. 外周血單個核細胞的采集
1.1用血細胞分離機采集患者自身的外周血單個核細胞 80 - 100 ml。
1.2淋巴細胞分離液密度梯度離心法進一步純化單個核細胞 （PBMC）。
1.3無血清培養液洗滌 2 次，獲得純度在 90% 以上的 PBMC,細胞數量需達到 1-3 x108。