常見問題 |
具體情況 |
可能的原因 |
處理辦法 |
備注 |
|
樣品準備問題 |
菌培養不好或失敗 |
抗性不對或菌已死 |
核對抗性，盡可能提供載體信息。 |
|
|
或菌培養條件特殊 |
重新提供菌液，或提供2μg純化質粒。 |
|||
|
質粒提不出 |
質粒拷貝數極低或 |
客戶自己采取大量提取的方法提供2μg純化質粒。 |
||
|
培養方式不當 |
||||
|
質粒產量很低 |
低拷貝數質粒或 |
客戶自己采取大量提取的方法提供2μg純化質粒。 |
||
|
培養方式不當 |
||||
|
自帶質粒或已純化PCR產物量極低 |
是否為電泳法定量， |
質粒：電泳檢測濃度大于100ng/ul，體積大于20ul。 |
測OD值法不可靠,電泳檢測 |
|
|
總量是否足夠 |
已純化PCR產物：根據片段長度提供足夠量的模板，一般要求是100ng/反應/Kb，進行多個反應的應相應增加量。 |
|||
|
測序出現雙峰或信號中斷 |
雙峰 |
重復序列，如polyT、polyA或幾個堿基重復 |
用反向引物測互補鏈。 |
此類問題主要與樣品有關 |
|
質粒測序在插入序列中出現套峰 |
可能是樣品非單克隆，挑其他測序。 |
|||
|
PCR產物測序中，某一點后序列變亂 |
可能是存在移碼突變，這是正常的，也可以后測序。 |
|||
|
PCR產物中一個或多個位置有套峰 |
序列中存在突變，這是正常的，也可以后進行測序。 |
|||
|
PCR產物測序前部分雙峰 |
引物二聚體污染或產物不純，后測序。 |
|||
|
質粒測序時整個結果雙峰 |
引物特異性不好，序列中存在通用引物的同源序列；改用其他引物測序。 |
|||
|
質粒和PCR產物測序出現雙峰 |
引物不純，測序時只要單一引物，請不要將雙向PCR引物混合；合成的引物沒有純化，或純化不好。重新合成引物測序。 |
|||
|
信號迅速衰減或中斷 |
模板GC二級結構區后 |
難以得到好的測序結果，亞成較小的片段進行測序 |
||
|
模板GT二級結構區后 |
測反向互補序列，AC結構不影響測序 |
|||
|
嚴重的重復結構 |
測反向互補序列 |
|||
|
模板特性決定的 |
根據具體情況決定 |
|||
|
信號極弱或無信號 |
模板質量差 |
重新提供菌液或純化PCR產物 |
||
|
質粒樣品：引物不符 |
盡量提供載體詳細信息，核查引物 |
|||
|
引物不適宜測序 |
測序引物比PCR引物要求高，隨機引物和簡并引物不能用于測序，較長的PCR引物也不能用于測序。重新設計引物測序，對PCR產物而言建議到載體上用通用引物進行測序 |
|||
|
質粒產量極低 |
客戶自己提供2μg純化好的質粒 |
|||
|
PCR產物定量極低 |
重新電泳檢測已純化的PCR產物，確認有足夠的量，或提供PCR原液由公司進行純化 |
|||
|
測序結果正常，與預期不符 |
找不到引物 |
質粒模板 |
檢測是否為空載體，從其互補鏈上尋找，位點離測序引物太近，長插入片段未測通。 |
|
|
PCR模板 |
不可能找到所用的測序引物，短片段可以從互補鏈上找到另一段的引物，長片段由于測不通，無法找到相應序列想得到全序列，短片段可以從兩端進行測序，長片段需要經后進行測序。 |
|||
|
結果完全不對 |
請提供詳細資料我們會根據結果具體分析。 |
基因測序技術基因測序技術也稱作DNA測序技術，即獲得目的DNA片段堿基排列順序的技術，獲得目的DNA片段的序列是進一步進行分子生物學研究和基因改造的基礎。基因測序技術的發展歷史1977年，Walter......
荷蘭科學家研究報道了一種給中樞神經系統腫瘤快速分類的技術，結合快速測序和深度學習AI模型，或能在不到90分鐘內完成分子診斷。相關研究近日在線發表于《自然》。研究結果顯示術中進行腫瘤分子診斷以輔助手術決......
在進行常規的DNA檢測時，樣本中通常含有許多目標DNA以外的分子，這可能會干擾結果。據美國《科學時報》5日消息，美國馬薩諸塞大學阿默斯特分校的研究人員開發出一種技術，無需額外成本即可將DNA檢測靈敏度......
近日，一家名為UltimaGenomics的年輕公司在美國奧蘭多舉行的基因組生物學技術進展會議上表示，通過對現有技術進行調整，它可以每次100美元的價格（現行價格的1/5）提供人類基因組測序服務。據《......
美國斯坦福大學醫學院科學家領導的聯合團隊開發的一種新的超快速基因組測序方法，可在平均8小時內診斷出罕見遺傳疾病，這是標準臨床護理領域中幾乎聞所未聞的壯舉。相關研究論文日前發表在《新英格蘭醫學雜志》上。......
通常，98%的宮頸癌是由人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）引起，而HPV疫苗可以預防HPV感染，使宮頸癌發病率降低約71%。此外，研究表明約20％-40％的人類癌癥由細菌和......
北京大學黃巖誼教授帶領的團隊在《NatureBiotechnology》期刊上在線發表《基于信息理論來修正錯誤的高準確度熒光產生DNA測序方法》，這標志著我國學者已成功刷新DNA信息解讀的精確程度，從......
日前，北京大學黃巖誼教授帶領的團隊在《自然—生物技術》期刊上在線發表《基于信息理論來修正錯誤的高準確度熒光產生DNA測序方法》，這標志著我國學者已成功刷新DNA信息解讀的精確程度，從根本上提高了測序方......
在DNA測序過去的40年中，我們見證了諸多技術的變革和測序規模的極度增長。從幾千個堿基到第一個人體基因組，乃至當前數以萬計的人體和無數其它的基因組。包括作為大量分子現象的“計數器”在內，DNA測序被廣......
關于古代人類DNA的研究并不是一項享有平等機會的努力。過去10年間，早期歐洲人和亞洲人的部分基因組被測序了上百次，歐亞歷史也在這個過程中得以改寫。然而，由于基因材料在溫暖、潮濕的氣候中衰變得非常迅速，......