DNA的測序技術3

(二)：測序膠的制備

１：玻璃板的處理

Ａ，長板（不帶凹槽、反硅化處理，粘膠板）

a,２N NaOH浸泡１小時以上，自來水沖洗，海綿或軟布蘸洗滌劑將板清洗干凈，自來水沖洗掉全部洗滌劑，無離子水中過三遍，晾干。b, 在1ml95%乙醇，0.5%冰乙酸中加入5μl粘合硅烷。c, 用b中所配溶液浸透薄棉紙，用此薄棉紙均勻擦拭玻璃板d，晾干后，用95%乙醇單向擦拭該板，然后略微用力沿垂直方向擦拭該板。重復３此這一乙醇擦拭過程。

Ｂ：短板（帶凹槽、硅化處理，不粘膠板）

a,海綿或軟布蘸洗滌劑將板清洗干凈，自來水沖洗掉全部洗滌劑，無離子水中過三遍，晾干。b，用硅化液浸透的薄棉紙均勻擦拭該板。c，晾干后，用薄棉紙擦掉多余的硅化液。

２，按圖將兩塊玻璃板及夾條安裝好。

３，制膠 ６％的變性膠

Acr/Bis 19:1 ,

尿素 8M

Tris 90mM

硼酸 90mM

EDTA 2mM

TEMED(%) 0.05

抽氣 ４℃保存

臨用前按400μl/75ml預混液的比例加入過硫酸氨(100mg/ml)

４：灌膠

（三）：電泳

１，膠凝后，插入鯊魚齒,

２，將Ⅰ中制備好的樣品在90℃加熱２分鐘

３，加樣，電泳，維持2000伏以上恒壓（在加樣前，同樣電壓預電泳），直至指示劑跑到膠下沿。

電極緩沖液為1×TBE。

（四）：銀染

１，電泳結束后，橇開板，將附著膠的一塊板置于固定/終止液中浸泡過夜或震蕩3０分鐘，直至指示染料消失。

２，凝膠洗滌，用超純水震蕩洗滌膠３次，每次２分鐘，凝膠板從水中取出后，豎起控水１０－２０秒。