DNA熒光染色的樣品制備實驗

PBS

DNA熒光染料 流式細胞儀

DNA是細胞內含量比較恒定的參量，隨著細胞增殖周期的各時相而發生變化。熒光染料（如PI）可選擇性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的雙螺旋堿基之間，與細胞特異性結合，DNA含量與熒光染料的結合量成正比，因此通過測定熒光強度可獲知細胞的增殖情況。

1． 將固定過的細胞離心（500～1000rpm，5min）棄上清液，再用PBS洗滌2次。

2． 用PBS調整細胞濃度，每份為1×106個細胞/100μl。

3． 加入1000μl DNA 熒光染料（通常用Coulter公司提供的DNA染色試劑盒），室溫下避光染色15 min。

4． 上流式細胞儀檢測。

樣品的制備可分析細胞周期各時相的百分比，同時可粗略觀察有無凋亡細胞現象，如果用對照液（雞紅細胞）作參照標準，可進行細胞DNA倍體分析，通過DNA指數（DNA index，DI）衡量DNA的相對含量，DI可用下式計算：

DI＝樣品G0/G1期的均值／正常二倍體細胞G0/G1期均值