HPLC分類及其原理

HPLC分類有很多種，可以根據不同的依據進行分類。

1. 根據流動相和固定相的極性不同，HPLC可以分為正相色譜和反相色譜。

正相高效液相色譜： 色譜柱中的固定相是由硅膠、氧化鋁等極性化合物組成。當色譜運行時，由于樣品中的極性化合物對固定相有較強的親和力，使它們在色譜柱中的保留時間比非極性化合物長，因此非極性化合物最先被洗脫出來。許多物質都可以用正相色譜法分析，但由于藥物、食物和其他生物制品大都是非極性的，所以在日常生活中應用不如反向色譜法廣泛。

反相高效液相色譜 ：固定相由非極性化合物組成，如十八烷基硅烷、C18、C8等有機化合物。流動相是極性的。因此，極性高的化合物最先被洗脫，低極性或無極性的化合物最后洗脫。

HPLC大都是對藥物、食品、生化分子等物質進行分析，而它們在自然界中都是極性物質（水溶性）。因此，反相高效液相色譜應用更為廣泛。

2. 根據分離原理的不同，HPLC可分為以下六種。

親和色譜： 主要利用樣品與固定性之間的親和性，實現分離。

離子交換色譜： 基于固定相與流動相的帶電基團發生可逆交換，達到分離目的。離子交換樹脂用于分離含有帶電離子的樣品。對于陰離子，使用陰離子交換樹脂；對于陽離子，使用陽離子交換樹脂。主要用于分離酸性和堿性化合物。

離子對色譜： 在反相色譜的流動相或固定相中加入離子配對劑，與樣品中可電離的成分形成“對離子”。常用的離子配對劑有戊烷、己烷、庚烷或辛烷磺酸鹽等。

吸附色譜： 是利用吸附性不同的原理，根據樣品中的組分對固定相的親和力不同而發生分離。

空間排阻色譜： 按樣品中的組分的分子大小順序進行分離。色譜柱是由瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等軟凝膠制成，也可用烷基葡聚糖、聚苯乙烯等半剛性凝膠。

手性色譜： 用于分離樣品中的光學活性異構體。固定相采用化學鍵合硅膠。常應用于醫藥、生物等領域。

3. 根據分析目的不同，HPLC可以分為分析型液相色譜和制備型液相色譜。

分析型液相色譜： 主要利用檢測器對混合物中各組分進行定性和定量分析。

制備型液相色譜： 主要是對混合物中各組分進行分離純化。制備型的色譜柱和進樣量都比分析型大。

4. 正如大家所知道的，混合物的分離是由于流動相流過HPLC色譜柱完成的，其中流動相可以是單一的溶劑，也可以是混合溶劑，因此HPLC可以分為等度洗脫和梯度洗脫兩種類型。

等度洗脫： 只有一種溶劑，所有的操作都是在一種溶劑下進行的。

梯度洗脫： 流動相由兩種或兩種以上的溶劑組成，并不斷改變其濃度配比。