HPLC基本維護故障診斷交流講座

1.判斷儀器脫氣機是否正常：打開purge閥，流速設為2ml/min，然后提起過濾頭，讓體系進一些空氣，再放下過濾頭，看氣泡是否會減少來判斷脫氣機是否起作用；

2. 溶劑過濾頭不可超聲清洗，可用35%硝酸浸泡1小時后再用溶劑清洗；

3. EDTA、乙二胺四乙酸等會對液相柱的不朽鋼產生腐蝕；四氯化碳與2-異丙醇、四氫呋喃不可混合使用，但可單獨使用；

4. 溶劑的使用：每兩天更換或重新過濾溶劑(尤其是水，需要每天更換)；流動相過濾是為了去除微生物，一般水要放在棕色瓶中；

5. 判斷purge閥的濾芯是否需更換：用水作流動相時，流速為5ml/min時，正常泵壓應為0bar(若打開purge閥時，泵壓超過10bar時需更換濾芯)；

6. 若用非極性溶劑作流動相，則需更換泵中起密封作用的“黑草帽”(適合反相的材料為石墨+聚四氟乙烯，而適合正相的為 )，而且必須一對同時更換，否則損壞更快；

7. 密封墊的沖洗：當流動相中鹽的濃度>0.01M時，可減少密封墊的磨損；用1%異丙醇溶液沖洗活塞桿中析出的鹽(加異丙醇是為了防止細菌生長)，流速設為3-5滴/min；泵開著，洗鹽裝置也須開著；

8. 泵頭不可用超聲清洗(可用乙醇、水清洗)、寶石桿不可超聲，石英窗可用超聲清洗；

9. 緩沖鹽的通道放在比例閥的下面，只有兩相的話，只用一邊(鹽在下面，有機相在上面)；

10.雙元泵為泵后混合方式(為高壓混合方式，不易進氣泡)，而四元泵為低壓混合方式；

11.出口球型閥(outlet ball valve)可用超聲清洗；

12.雙元泵有一個篩網(sieve)可控制低流速；

13.流動相使用了緩沖鹽，則必為反相柱(不可長時間用水沖)，一般可沖20-30min，然后加入有機相(如甲醇)，濃度逐步加大，直至100%甲醇；

14.反相和正相轉換時，一般要做溶劑過渡(最佳為異丙醇)，因為粘度大，流速不可設太大，不要超過 1ml/min(完全置換原來溶劑所需溶劑體積=體系體積(柱體積+1.5ml)×5)；

15.比例閥內漏：抬起有嫌疑的通路，看管內流動相體積是否減少(抬起時同時打開purge閥)；

16.泵壓力不正常可能原因：氣泡、主動閥故障、出口閥故障、密封墊或柱塞桿磨損，滲漏或堵塞、比例閥故障、傳感器故障、使用比例閥混合時鹽濃度太高；

17.自動進樣：旁路狀態、主路狀態；手動進樣：load狀態至inject狀態(最好滿刻度進樣，建議吸3倍以上進樣體積)，小體積進樣則以小于1/2進樣閥體積為佳；平時進樣閥最好保持在inject狀態(最右邊狀態)；

18.進樣流程：插針——inject狀態——load狀態——進樣(緩慢)——inject狀態——拔出針(進樣閥后有兩根廢液管)；

19.VWD(可變波長)檢測器：檢測器后out廢液管不可太短，否則流通池容易進氣泡，也不可太長，否則易壓碎流通池；

20.DAD檢測器(優勢為優化條件方便)：最大波長選擇——要選擇溶劑沒有吸收的位置(避開約20nm)；VWD檢測器的靈敏度略高于DAD檢測器；濾光片中鈥玻璃用于校準波長；若要檢測器的靈敏度提高則要開大狹縫(二極管陣列前狹縫默認為4nm)；

21.DAD檢測器的氘燈可用于VWD檢測器，但反之則不行；鎢燈、氙燈壽命長，可隨開隨用，但“氘燈需要預熱(10幾分鐘)(壽命為1000小時)，1-2小時不用，不用關，還是開著更好，氘燈放時間長容易衰變”，燈可進行測試；

22.測定條件設定：reference wave(流動相中溶劑的吸收)可以不設，梯度洗脫時參考波長要設，否則會導致基線漂移，DAD可選一個樣品沒吸收的波長作為參考光；band width(VWD設為光譜的半譜帶寬度，而DAD檢測器則不用設)(此范圍內作色譜圖可降低噪音，信噪比更好，但信號會降低)；參考波長選擇原則：樣品沒有吸收，但靠近樣品最大吸收的位置；參考光波長帶寬必須大于或等于測量光波長帶寬；DAD選條件時要存所有光譜圖(spectrum)；氘燈(190-800nm)，但有效范圍為190-600nm，鎢燈(470-950nm)，若用470-800nm時兩燈同開則強度加大；

23.基線噪音大原因：泵壓不穩、有氣泡、柱污染

24.清洗在線脫氣機及比例閥(尤其是長期使用水相或緩沖鹽的通路)：先用水沖洗，再用甲醇沖洗，可以打開purge閥，使用5ml/min的流速，也可用IPA清洗：A、Buffer B、MeoH C、Water D、CH3CN 分析：A:B=20:

25.流動相pH>9.5或<2.3時，進樣閥應更換tefzel轉子密封，可耐受壓：VWD(40bar)，MWD(120bar), FLD(20bar), RID(56bar)；RID,FLD永遠是最后一個檢測器