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  • 發布時間:2019-04-26 20:26 原文鏈接: HumanEmbryonicStem(ES)CellProtocols——MediaandReagents

    Serum Free Media for human ES cells on MEFs: can last for 7-10 days

    Final Concentration

    Amount for 250ml Stock solution

    80% DMEM-F12

    200ml

    20% KO Serum Replacer

    50ml

    1% Non-essential Amino Acids

    2.5ml

    1mM L-glutamine (see recipe)

    2.5ml

    0.1mM b-mercaptoethanol

    part of L-glutamine

    4ng/ml bFGF (see recipe)

    0.5ml

    L-glutamine stock solution: Prepare on a per-use basis

    • 0.146g L-glutamine

    • 10ml Ca/Mg free PBS

    • 7 ul b-mercaptoethanol

    bFGF Stock: Store aliquots at –20 or –70

    • 10ug vial of bFGF

    • 5ml 0.1% Fraction V BSA

    • Aliquot 0.5ml into sterile tubes

    0.1% Fraction V BSA:

    • 0.1g Fraction V BSA

    • 100ml PBS with Ca and Mg

    • Filter Sterilize

    Collagenase IV Split Media: This media lasts 2-3 weeks

    • Final concentration of 1mg/ml in DMEM-F12 media ie. 0.05g collagenase IV in 50ml DMEM-F12

    Cell Freezing Media:

    Cryopreservative Medium:
    Final Concentration

    Amount for 10ml Stock Solution

    60% DMEM-F12

    6ml

    20% defined FBS

    2ml

    20% DMSO (do not filter sterilize)

    2ml

     

    Resuspension Medium:
    Final Concentration

    Amount for 10ml Stock Solution

    80% DMEM-F12

    8ml

    20% defined FBS

    2ml


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