LCMS8030定性鑒別阿膠藥材

  摘要：本文建立了一種使用島津高效液相色譜儀LC-20A和三重四極桿質譜儀LCMS-8030聯用定性鑒別阿膠藥材的方法。本文參照《中國藥典(2015版)》中阿膠項下，使用胰蛋白酶酶解阿膠樣品，選擇阿膠的特征肽作為定性依據；按照藥典要求建立了m/z539.8>612.4和m/z539.8>923.8檢測離子對，且對照品溶液及市售藥材樣品中阿膠特征肽的信噪比均遠遠大于3:1。該方法完全滿足藥典的要求，實現阿膠藥材的快速、準確、炅敏的定性分析。

    關鍵詞：高效液相色譜 三重四極桿質譜 阿膠特征肽段

    膠類藥材是具有典型民族特色的傳統中藥，為動物的皮熬制而成的明膠類物質。阿膠系驢皮經煎煮濃縮成的固體膠，能補血滋陰、潤燥止血，用于貧血心悸、燥咳咯血、先兆流產、產后血虛、肌痿無力，是中醫臨床常用補益藥。阿膠經水解后其膠原蛋白變為分子量更小 的肽類，從而失去原有膠原蛋白的性質，無法進行來源鑒別。2015版藥典對阿膠的定性方法進行了修訂，由2010版的茚三酮顯色法修改為采用液質聯用的方法檢測特征肽段，方法更科學可靠。

    本文利用島津三重四極桿液質聯用系統LCMS-8030對阿膠中的特征肽段進行了分析，建立了阿膠定性鑒別分析方法，可為該類樣品的分析提供參考。

    ■實驗部分

    1.1 儀器

    島津高效液相色譜儀LC-20A與三重四極桿質譜儀LCMS-8030聯用系統。具體配置為LC-20AD×2輸液泵，DGU-20A3在線脫氣機，SIL-20AC自動進樣器，CTO-20A柱溫箱，CBM-20A系統控制器，LCMS-8030三重四極桿質譜儀，LabSolutions Ver.5.60SP2色譜工作站。

    1.2 分析條件

    液相條件

    色譜柱：Inertsil ODS-4 (2.1 mm I.D.×250 mm L., 5μm)
    流動相：A相-0.1%甲酸水溶液
            B相-乙腈
    流速：0.3 mL/min
    柱溫：40℃
    進樣量：5μL
    洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為5%，洗脫程序見表1。 

    表1 梯度洗脫程序

    質譜條件
    離子化模式：ESI，正離子模式
    離子噴霧電壓：+4.5kV
    霧化氣流速：氮氣3.OL/min
    干燥氣流速：氮氣15L/min
    碰撞氣：氬氣
    DL 溫度：250℃
    加熱模塊溫度：400℃
    掃描模式：多反應監測(MRM)
    駐留時間：100 ms
    延遲時間：3 ms

    表2 MRM優化參數

    1.3 對照品和樣品配制及前處理方法

    取對照藥材或待測樣品粉末0.1g，加1% NH₄HC0₃溶液50mL，超聲處理30min，使用微孔濾膜濾過。參照《中國藥典(2015版）》阿膠項下，取濾液100μL，置于進樣瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析純胰蛋白酶適量，加1% NH₄HC0₃溶液溶解，制成每lμL中含lmg胰蛋白酶的溶液)l0μL，搖勻，37℃恒溫酶解12h，作為對照藥材溶液或供試液，進LCMS-8030分析。

    ■結果與討論

    2.1 阿膠對照藥材的MRM色譜圖

圖1 阿膠對照藥材特征多肽的MRM色譜圖

    LCMSMS分析獲得阿膠對照藥材特征多肽的MRM色譜圖，保留時間為：13.76 min，圖1中兩對特征離子對539.8>612.4以及539.8>923.8的信噪比分別為1161和705，充分滿足藥典中要求的色譜峰信噪比大于3:1的要求。

    2.2 實際樣品分析

    對市售的一種阿膠藥材樣品進行分析，結果如圖2和表3所示。

圖2 市售阿膠樣品的MRM色譜圖

    表3 實際樣品中驢皮源特征肽段分析結果

    ■結論

    本文建立了一種使用島津三重四極桿液質聯用儀LCMS-8030鑒定阿膠中特征肽段，實現了阿膠定性鑒別的方法。該方法所檢測阿膠特征肽段MRM色譜圖中離子對539.8>612.4, 539.8>923.8的響應明顯，完全滿足2015版藥典要求色譜峰信噪比大于3:1的要求，市售阿膠藥材樣品分析結果表明所測樣品中含有阿膠成分。因此，本方法可為應對藥典要求實現阿膠藥材的快速、準確、靈敏的定性鑒別提供參考。