LCMS／MS方法檢測動物組織中β興奮劑類藥物

衛生部近日匯總公布了《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單》，上海月旭公司從公布的黑名單中統計發現，包括三聚氰胺、蘇丹紅、孔雀石綠、人工合成色素等都在內。針對這些令人觸目驚心的食品添加劑，同時也為食品安全檢查和監管工作提供有力的技術支持和保障，上海月旭公司迅速組織相關人員研制出了方便、快速、準確的檢測方法，現將LC-MS/MS檢測動物組織中β-興奮劑類藥物的方法公布如下：

1. 適用范圍

適用于動物組織中鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺藥物的檢測。

2. 提取

將5g動物組織、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸鈉溶液置于50 mL離心管中，10000 rpm均質2 min。6000 rpm下離心2 min，將上清液轉至另一離心管中。用15 mL乙酸乙酯重復提取一次，合并提取液。

向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液，渦動1 min，然后再6000 rpm下離心1 min，收集下層水相。重復萃取一次，合并下層水相，用2.5 mol/L NaOH溶液調節pH至5.2，待凈化。

3. 凈化

活化/平衡：依次向Welchrom^? P-SCX（60mg/3mL）（上海月旭提供）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3mL 30 mmol/L鹽酸溶液，流出液棄去；

上樣：將上述提取液加入柱中，流出液棄去；

淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液棄去，并將小柱抽干；

洗脫：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，40℃下氮氣吹，50%乙腈復溶，過0.22μm濾膜，待分析；

4. 色譜質譜條件

4.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate XB-C18 液相色譜柱（2.1mm* 100 mm, 3 μm）（上海月旭提供）

流動相：
      A：0.1%甲酸水溶液
      B：乙腈
      梯度洗脫
      流速：0.2 mL/min
      進樣量： 10 μL
      柱溫：35 °C
      運行時間：12 min

4.2 質譜條件

掃描模式：MRM
      離子源：ESI+
      毛細管電離電壓：3.20 Kv
      孔電壓（cone）：45 V
      電離源溫度：100 ℃
      脫溶劑溫度：300 ℃
      錐孔氣流速：50 L/Hr
      脫溶劑氣流速：450 L/Hr

5. 結果

5.1 回收率和重現性實驗

將豬肌肉空白樣品經過液液萃取初步處理后，分別添加一定量的標準溶液，添加濃度分別為0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次內同一濃度做3次平行實驗，共3個批次（樣品典型回收率色譜圖見附圖）。

 

5.2 色譜圖
 

左圖  豬肌肉中添加0.1 mg/kg 鹽酸克倫特羅EIC譜圖        右圖  豬肌肉中添加0.1 mg/kg 萊克多巴胺EIC譜圖

本方法中使用到得耗材：

固相萃取小柱Welchrom^? P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)（上海月旭提供）
      色譜柱：Ultimate XB-18,50*2.1mm，3μm（P/N:Ult3B18205）（上海月旭提供）
      13mm，孔徑0.22μm尼龍針孔濾膜（P/N: WEL-SFNY213022）（上海月旭提供）
      12孔固相萃取裝置（WEL-Vac-12）（上海月旭提供）