LSM光學原理

      LSCM 主要基于共軛焦點技術設計而成，即以激光作為光源，采集時使激光光源、被測樣品和探測器處于彼此的共軛位置上。基本工作過程為:光源發射出的激光束經擋板上的照明針孔后形成一個點光源，其射出飛光線經雙色反射鏡發射后，通過顯微物鏡聚焦到樣品上的一點，該點由光源照射激發出熒光，透過顯微物鏡和雙色發射鏡聚焦到探測針孔形成共焦點，可由光電倍增管探測收集，被探測點所在的平面即為共交平面，經過計算機處理、成像和存儲過程，便得到了交面上一點的成像。同時，激光光束對樣品進行切面掃描，便可實現該平面的光學斷層成像，載物臺沿 Z 軸方向緩慢移動，可以使不同深度的樣品層進入焦平面，又可得到不同深度樣品層的成像。成像過程中，只有樣品焦平面上的點所激發的熒光可以在檢測針孔正確聚焦，從而備光電探測器接收，焦平面以外的光線到達檢測針孔時處于離焦狀態，因此被直接濾除，可見共焦探測針孔就像一個濾波器，非共焦面的背景均呈黑色，增強了反差，極大地提高了激光掃描共聚焦顯微成像系統的清晰度。