MDx2021：新冠快檢／HBV／結核等病原檢測技術平臺的升級

　　分析測試百科網訊 2021年5月20-21日，MDx 2021第七屆中國先進分子診斷技術與應用論壇在上海新發展亞太JW萬豪酒店開幕。本次論壇深度探討分子診斷技術升級及產品申報與臨床落地等前沿走向、基于測序的mNGS臨床落地方案、納米孔/單分子/固態納米孔技術平臺進展、PCR/RAA/dPCR等技術路線優化落地、MMCA/CRISPR/微流控/POCT等一體化、自動化核酸快檢產品開發等分子診斷行業痛點與年度熱門議題，與行業著名專家學者共同探討先鋒技術開發與產品應用，吸引了來自國內科研院所、臨床醫療機構、生物醫藥企業等近500位業內同仁參與。

MDx 2021第七屆中國先進分子診斷技術與應用論壇

　　上海交通大學生命科學技術學院副院長馮雁主持“新冠快檢/HBV/結核等病原檢測技術平臺的升級”專場，中國科學院院士、微生物分子遺傳學家鄧子新上臺致辭。

中國科學院院士、微生物分子遺傳學家鄧子新致辭

　　鄧子新院士在致辭中介紹了微生物核酸檢測的前沿之路，分享了分子診斷/個體化診療的發展歷史和全球新冠病毒感染、控制和檢測情況。

　　新冠疫情早期由于對新冠病毒認知不足，病毒檢測試劑盒供不應求，RT-qPCR試劑盒覆蓋位點少，容易出現“假陰性”問題，而新冠患者可能合并其他病原感染，單次檢測無法全部覆蓋。因此臨床上經常需要更加準確、快速而全面的檢測手段。

　　武漢戰疫中的納米孔靶向測序檢測技術（NTS）是一種在發酵過程中對噬菌體及雜菌污染進行快速診斷的方法，繼而開發出一套針對新冠病毒并兼查常見呼吸道病毒的NTS實時測序檢測平臺，具有快速、準確檢測的優勢。針對疫情早期疑似感染的門診病例和臨床確診病例，NTS相對RT-qPCR顯著提高檢出的敏感性。NTS可以監測基因突變，進行S和L譜系分類，關聯突變與患者臨床表型及病情程度差異關系確定患者細菌真菌同步感染，指導合理科學治療等。

廈門大學分子診斷教育部工程研究中心主任 李慶閣

報告題目：多色探針熔解曲線分析技術下的一體化新冠突變株檢測方案

　　報告內容包括了新冠病毒（SARS-CoV-2）的生命周期、基因組與蛋白、SARS-CoV-2基因組變異分析、SARS-CoV-2變異分析與監測靶標選擇、SARS-CoV-2的系統演化等。SARS-CoV-2核酸檢測唾液樣本檢測中，唾液樣本中的病毒載量較鼻咽拭子樣本高，陽性率也高。

　　多色探針熔解曲線分析（MMCA）可鑒定新冠病毒變異株B.1.1.7，選擇N501Y/D614G/HV69-70del和Y144del四個突變位點，可特異性鑒定B.1.1.7型。在鑒定B.1.617型時，選擇L452R/P681R/E484Q三個突變位點鑒別B.1.617，并區分B.1.617.1和B.1.617.2。新冠病毒變異株鑒定試劑具有快速、簡便、準確性高、靈敏度高、高效等特點，使用該方法在實時PCR平臺上實現檢測靶標數據達到10倍提升。該方法還可用于血培養陽性病原體識別和耐藥基因鑒定，子宮頸炎預測模型等。

上海健康醫學院專業（系）主任，國家藥監局高級研修學院特聘專家 蔣海洪

報告題目：《醫療器械監督管理條例》修訂與影響

　　報告介紹了《醫療器械監督管理條例》的立法思路和修訂重點內容等。

　　《醫療器械監督管理條例》的立法思路，一是鞏固審評審批制度改革成果，全面構建注冊人制度；二是貫徹“放管服”改革精神，促進產業創新。2021年版《醫療器械監督管理條例》修訂重點內容在產業創新方面，涵蓋產業規劃、創新體系、創新表彰獎勵、未在境外上市創新器械、附條件審批、應急使用、鼓勵醫療機構開展臨床試驗等；在構建注冊人制度方面，涵蓋產品全生命周期責任、質量管理能力審查、全生命周期義務、直接委托生產、生產過程管理、生產條件改變、注冊人自銷產品等。

　　違法IVD企業要承擔嚴格的法律責任，包括違法產品、工具、設備、原材料的沒收風險；違法貨值金額5倍以上30倍以下罰款；行政許可證照的吊銷、注銷風險；追究刑事責任的風險；企業關閉、行業禁入的風險等。

Bio-Rad LSG基因產品線高級產品經理 趙云

報告題目：ddPCR技術在全球COVID-19疫情中的突破性應用

　　qPCR是間接且相對定量，依賴外部參照，單個樣本的可用Cq并不是唯一確定的，Cq值易受PCR效率變化的影響，數據精確度低，CV%很容易超過50%。報告還介紹了使用RT-qPCR和RT-ddPCR在臨床樣本中的不同案例結果和差別。總的來說，ddPCR技術具有絕對定量（直接計算DNA分子并消除標準曲線），耐抑制劑（終點PCR使定量與擴增效率脫鉤），高靈敏度（分區可以富集稀有靶標）等優勢。

杭州禾騎士未來生物科技有限公司CEO 程奇

報告題目：基于重組酶介導鏈替換核酸擴增技術RAA的新冠核酸快檢

　　報告中介紹了主要研究目標，包括Cas9或Cas13突變體篩選——建立定向突變基因庫，篩選Cas9突變株，實現人體溫度下高活性、單堿基編輯的改造酶，解決在體編輯難點；基因編輯關鍵新酶發現——采集特定環境細菌或古細菌，篩查Cas9新酶，尋找優于存在Off-target，穩定性差及在體編輯效率不足的原體系；CRISPR/Cas在體輸運體系建立——通過外泌體包裹Cas酶系統，定向導入靶器官或病灶，降低副反應，提高治療效率。

　　重組酶介導鏈替換核酸擴增技術（RAA技術）是一種在恒溫核酸快速擴增技術，利用從細胞或真菌中獲得的重組酶，在常溫下該重組酶可與引物DNA緊密結合，形成酶和引物的聚合體，當引物在模板DNA結合蛋白的幫助下，打開模板DNA的雙鏈結構，并在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互補鏈，擴增產物以指數級增長。利用熒光探針標記，可以實現定時定量的結果分析，通常5-15分鐘就可得到熒光檢測結果。

博奧生物集團高級副總裁兼工程中心常務副主任、北京博奧晶典生物技術有限公司首席執行官 邢婉麗

報告題目：病原體檢測體系的構建和應用

　　報告內容包括病原體檢測市場需求，病原體檢測手段，博奧晶典病原體檢測體系構建等。

據BCC研究分析，2020年全球新冠檢測市場高達603億美元，預計至2027年將增至1951億美元，CAGR為15%。國內病原體檢測市場（非新冠類病原體）分析，中國感染性疾病市場規模預計將達到24億美元，占整體IVD（非新冠檢測類）體外爭端市場的50%。其中，分子檢測市場增速最快（年復合增長率可達15.3%）。

　　博奧推出了一種感染病原體檢測手段（分子生物學）生物芯片法——全集成微流控芯片實驗室技術，是真正意義上的全集成全自動芯片系統，具有創新微流控技術；樣本加入芯片后可直接上機檢測，無需其他試劑和操作；每張芯片2人份，每臺儀器一次檢測一張芯片；最快35分鐘出陽性結果。針對病原體檢測，博奧能夠提供整體解決方案，包括乙肝病毒基因分型和耐藥突變位點檢測試劑盒、常見呼吸道病原體的鑒別診斷、人乳頭瘤病毒（HPV）分型檢測試劑盒（微陣列芯片法）等。

上海交通大學生命科學技術學院副院長 馮雁

報告題目：新型Argonaute核酸酶功能表征及在核酸檢測中應用

　　報告內容主要介紹了研究背景、A-Star SNV檢測技術和RADAR病毒檢測技術。經濟全球化下的感染性疾病流行使核酸檢測成為焦點，核酸檢測能夠助力重大疾病篩查、早診和伴隨治療。新型核酸酶的發現和應用必將推動基因檢測領域變革，CRISPR/Cas核酸檢測技術也面臨一些挑戰。

　　Argonaute（Ago）蛋白是新型可編程核酸酶，廣泛存在真核和原核生物中，通常具有4個結構域，原核Ago催化與guide互補的靶標序列的剪切，對靶標序列無任何限制。A-Star低豐度SNV富集檢測技術具有偶聯PCR擴增特異性富集的技術優勢：高溫區分剪切，與常規PCR結合；對任意靶標序列設計、具有高特異性；單酶實現多重檢測；模塊設計可兼容多終端檢測。A-Star體系對極低豐度樣品集作用更顯著，可高效、準確富集檢測高背景臨床樣本中稀有突變基因，已實現一管式多重檢測、多靶標之間無相互干擾。

　　等溫擴增-雷達（RADAR）病毒檢測技術是核酸酶檢測新技術，是基于Ago可編程核酸酶的核酸快檢技術，剪切產物作為“新生gDNA”，誘發對互補靶標ssDNA的次級剪切。RADAR可引入內標基因，防止假陰性；一管雙重，檢測靈敏度高；特異性試驗結果表明，新冠核酸特異性分子在對21種常見呼吸道病原體均無交叉反應。

北京納捷創始人兼首席科學家 王海濱

報告題目：臨床對HBV DNA檢測敏感性的需求及實現技術

　　磁珠“動態核酸提取方法”，是核酸純化自動化、敏感性提高，相比傳統核酸提取方法，磁珠法獲得的核酸純度和得率都有大幅度的提升。磁棒法提取核酸，通量通常有8/16/32/96通道，相對于抽吸法，磁棒法的優點是每一步的液體不殘留，因為磁棒只帶走磁珠，轉移到下一個步驟相應的反應孔中。靜態核酸提取具有多方面的技術優勢：在擴增管純化核酸，樣本加樣無需混勻，核酸裂解無需震蕩，磁珠漂洗無需吹散，核酸擴增無需洗脫。

上海交通大學生命科學技術學院微生物代謝國家重點實驗室研究員 賀新義

報告題目：sDNA-SBD核酸檢測技術開發

　　報告中介紹了團隊開展的項目，CRISPR應用于核酸檢測中的技術特點，Cas13a特點是靶向和RNA反式切割的活性的一體化，具有恒溫檢測、特異性佳、靈敏度高等優勢。SBD結構域可以和高活性反應器蛋白融合，提高檢測靈敏性。反應器（X）和熒光探針（P）有更多更好的選擇。量子點熒光的淬滅時長是有機熒光染料的24倍以上，信號具有累積效應。

　　研究團隊首先建立NEARs恒溫擴增體系（擴增與硫修飾DNA復性的融合），篩選適合核酸檢測的SBD同源蛋白，篩選到有潛力進行RNA編輯的SBD同源蛋白。硫修飾核酸在反義寡核苷酸領域已經經過了幾十年的研究，其安全性和有效性被充分證實；硫修飾RNA同時具有特異靶向和提高半衰期的作用；向導RNA的序列和長度可編程性高，編輯目標適用范圍廣。篩選SBD同時也進行改造適用于核酸檢測的SBD，對用于核酸檢測的SBD-X融合蛋白的構建及純化，SBD融合蛋白無擴增信號檢測。