TRIzol法同時提取RNA、DNA、蛋白質

TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液分為水相和有機相，RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中間層可回收DNA；用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質。

TRIzol試劑可用于小量樣品（50～100mg組織、5×106細胞）也適用于大量樣品（≥1g組織、>107細胞）。對人，動物，植物組織，細菌均適用，可同時處理大量不同樣品，整個提取過程在一小時內即可完成。

分離的總RNA無蛋白質和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA篩選，體外翻譯，RNase保護分析和分子克隆。在用于RT-PCR時如果兩條引物存在于一個單一外顯子內，建議用無RNase的DNaseⅠ處理RNA樣品，避免出現假陽性。共純化的DNA可用作標準，比較不同樣品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。蛋白質可用于Western Blotting。

規格：100ml 黃色透明液體

儲存條件：2～8℃避光保存12個月

注意：請勿直接接觸皮膚或吞咽，以免灼傷。如接觸皮膚應立即用洗滌劑和大量水沖洗。忌用乙醇擦洗，乙醇會加重灼傷程度。

預防RNase污染注意事項：

1.經常更換新手套，皮膚上常帶有的細菌，霉菌可能成為RNase的來源。

2.使用滅過菌的RNA專用塑料制品避免交叉污染。

3.RNA在TRIzol試劑中時不會被RNase污染，但提取后繼續處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分鐘，然后用水徹底清洗，高壓滅菌，即可去除RNase。

4.配制溶液應使用無RNase的水（將水加入處理過不含RNase的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.01℅v/v，放置過夜，高壓滅菌。注：DEPC有致癌之嫌，需小心操作）。

RNA的提取

準備試劑：氯仿，異丙醇，75℅乙醇，無RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC處理過的水配制）。

操作步驟：

1. 勻漿處理：

a.組織將組織在液氮中磨碎，每50～100mg組織加入1ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養細胞　直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積（即3.5cm直徑的培養板）加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c.細胞懸液離心收集細胞，每5～10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1mlTRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。

2.將勻漿樣品在室溫（15～30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2～8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

6. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。