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  • 發布時間:2020-05-25 20:36 原文鏈接: WesternBlot實驗相關試劑的配制(一)

    30%(w/v)丙烯酰胺溶液  

    丙烯酰胺             29g

    甲叉雙丙烯酰胺       1g

    加去離子水,定容至 100ml 調整溶液 pH 值不超過 7.0,置棕色瓶中貯存于室溫或4℃。 

    10%SDS 

    SDS                    10g

    蒸餾水至             100ml

    50℃ 水浴下溶解,室溫保存。如在長期保存中出現沉淀,水浴溶化后,仍可使用。

    1.5mol/L Tris·HCl (pH8.8)

    Tris (MW121.14)      45.43g

    超純水              200ml

    溶解后,用濃鹽酸調pH至8.8,最后用超純水定容至250ml,室溫下保存。

    0.5mol/L Tris·HCl (pH6.8)

    Tris (MW121.14)      15.14g

    超純水            200ml

    溶解后,用濃鹽酸調pH至6.8,最后用超純水定容至250ml,室溫下保存。

    10% 過硫酸胺(AP)

    過硫酸胺             0.1g

    超純水               1.0ml

    溶解后,4℃避光保存,保存時間為1周。(可先將過硫酸胺干粉稱好分量后放在EP管中,一次性多裝幾管,使用時加入超純水即可) 

    20%Tween20  

    Tween20             20ml

    蒸餾水至             100ml

    混勻后4℃保存。

    1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

    PMSF                 0.174g

    異丙醇                100ml

    溶解后,分裝于1.5ml離心管中,-20℃保存。

    單去污劑裂解液(PMSF)

    1mol/L Tris·HCl (pH8.0)    2.5ml

    NaCl                                0.438g

    TritonX-100                           0.5ml

    蒸餾水至                                50ml

    混勻后4℃保存。使用時,加入PMSF至終濃度為100&mu;g/ml(0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50&mu;l)。

    RIPA裂解配方

    50 mM Tris-HCl pH 7.4

    150 mM NaCl

    1 mM PMSF (用前加)

    1 mM EDTA

    1% Triton x-100

    1% 脫氧膽酸鈉

    0.1% SDS

    G250 考馬斯亮藍溶液 (蛋白定量專用)

    考馬斯亮藍G250      100mg

    95%乙醇             50ml

    磷酸                      100ml

    蒸餾水至              1000ml

    配制時,先用乙醇溶解考馬斯亮藍染料,再加入磷酸和水,混勻后,用濾紙過濾,4℃保存。


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