總RNA提取實驗——CsCl法
實驗材料RNA試劑、試劑盒PBS異硫氰酸胍CsClDEPC無水乙醇儀器、耗材注射器電泳儀離心機培養箱實驗步驟一、 用于單層培養細胞 1. 室溫下用PBS冼滌細胞，每平皿用5 ml，洗2次。2. 在不超過108細胞中加入異硫氰酸胍溶液，并使之遍布整個平皿。3. 用橡皮細胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的細胞裂解液。4. 用裝有20-G針頭的皮下注射器往返抽吸裂解物，并合并在一起。 二、用于懸浮培養細胞 1. 用JS-4，2轉子離心回收≤108細胞，重懸于相當于1/2原有體積的PBS，并再次離心回收細胞。 2. 往離心管中加入3.5 ml 異硫氰酸胍溶液。 3. 用裝有20-G針頭的6注射器將粘稠的細胞裂解液注返抽吸4次，并將其移至一個干凈的試管中。 4. 在經硅化并高壓過的13 mmx......閱讀全文
總RNA提取實驗——CsCl法
實驗材料RNA試劑、試劑盒PBS異硫氰酸胍CsClDEPC無水乙醇儀器、耗材注射器電泳儀離心機培養箱實驗步驟一、 用于單層培養細胞?1. ?室溫下用PBS冼滌細胞，每平皿用5 ml，洗2次。2. ?在不超過108細胞中加入異硫氰酸胍溶液，并使之遍布整個平皿。3. ?用橡皮細胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的
CsCl法從組織中提取RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 液氮 組織胍溶液 十二烷基肌氨酸鈉 CsCl 組織重懸液 ? 乙酸鈉 酚 氯仿
CsCl法從組織中提取RNA
試劑、試劑盒 液氮 組織胍溶液 十二烷基肌氨酸鈉 CsCl 組織重懸液 乙酸鈉酚 氯仿 異戊醇 異戊醇 無水乙醇儀器、耗材 組織搗碎機 離心機實驗步驟 一 材料與設備1）液氮2）組織胍溶液：590.8 g 異硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 處理的水中，加入 25 mmol/LTris-Cl(p
2.1.6－CsCl法從組織中提取RNA
由于一些組織（如胰臟和睥臟）含有高濃度的內源性 RNA 酶，因此純化源于組織的 RNA 須更加小心。試劑、試劑盒液氮組織胍溶液十二烷基肌氨酸鈉CsCl組織重懸液乙酸鈉酚氯仿異戊醇異戊醇無水乙醇儀器、耗材組織搗碎機離心機實驗步驟一 材料與設備1）液氮2）組織胍溶液：590.8 g 異硫氰酸胍溶于 40
CsCl法從培養細胞中提取RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖溶液 硫氰酸胍溶液 CsCl TES 緩沖液 乙酸鈉緩沖液 無水乙醇 經 DEFC 處理的水
CsCl法從培養細胞中提取RNA
試劑、試劑盒 磷酸鹽緩沖溶液 硫氰酸胍溶液CsClTES 緩沖液 乙酸鈉緩沖液無水乙醇 經 DEFC 處理的水。儀器、耗材 離心機 注射器及20W針頭實驗步驟 一 材料與設備1) 磷酸鹽緩沖溶液 (PBS)2) 硫氰酸胍溶液：4mol/L 硫氰酸胍，0.lmmol/LTris-HClpH7.5，1%
2.1.5－CsCl法從培養細胞中提取RNA
通過硫氰酸胍提取和氯化銫離心法制備 RNA，適于分離細胞質和細胞核難分開的細胞以及富含 RNase 的細胞中的 RNA。試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖溶液硫氰酸胍溶液CsClTES 緩沖液乙酸鈉緩沖液無水乙醇經 DEFC 處理的水。儀器、耗材離心機注射器及20W針頭實驗步驟一 材料與設備1) 磷酸鹽緩沖溶液
中量提取質粒DNA（CsCl－密度梯度離心法）
中量提取質粒DNA（CsCl 密度梯度離心法） 2010‐07‐07李淵越1. 將菌液倒入裝有 50mL TB 的錐形瓶中，或從培養好的平板上挑取單克隆，錐形瓶置于37℃搖床350rpm 培養16-20h,至OD600 到10-12。（OD600 到40 為用TBS 培養基在我們的培養條件下所能達到
大量提取質粒DNA（CsCl－密度梯度離心法）
大量提取質粒DNA（CsCl 密度梯度離心法） 2010-7-7大量提取質粒DNA（CsCl 密度梯度離心法）李淵越1. 預約搖床、超速離心機。2. 配 TB 培養基（1L 錐形瓶中裝250 ml 培養液），并滅菌。質粒做好轉化，并涂板。3. 第一天早上，往 TB 中加入適量的Amp 或Kana。挑
通過CsCl－等密度梯度離心純化λ噬菌體顆粒實驗
實驗方法原理 CsCl 等密度梯度離心用于制備最高純度的感染性 λ 噬菌體顆粒，它沒有任何細菌核酸的污染。從這種噬菌體顆粒中提取的 DNA 可用作 DNA 測序的模板、亞克隆至質粒載體和產生用于原位雜交的探針。這種方法第二個優點是，由它所獲得的噬菌體原種是高度濃縮的（大于 1011 cf
通過CsCl－等密度梯度離心純化λ噬菌體顆粒實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 CsCl 等密度梯度離心用于制備最高純度的感染性 λ 噬菌體顆粒，它沒有任何細菌核酸的污染。從這種噬菌體顆粒中提取的 DNA 可用作 DNA 測序的模板、亞克隆至質粒載體和產生用于原位雜交的探針。這種方法第二個優點是，由它所
通過CsCl－等密度梯度離心純化λ噬菌體顆粒實驗
CsCl 等密度梯度離心用于制備最高純度的感染性 λ 噬菌體顆粒，它沒有任何細菌核酸的污染。從這種噬菌體顆粒中提取的 DNA 可用作 DNA 測序的模板、亞克隆至質粒載體和產生用于原位雜交的探針。這種方法第二個優點是，由它所獲得的噬菌體原種是高度濃縮的（大于 1011?cfu/ml)，在 4℃ 保存
用－CsCl，Percoll,－Nycodenz,－metrizamide作自形成密度梯度離心－三
表（三）metrizamide及其溶液的性質（20℃）濃度密度g/ml折射率粘性滲透率百分比濃度％（W/V）Molar00.0000.99821.33301.00100.1271.05121.34831.3107200.2531.10621.36461.6180300.3801.16121.3809
用－CsCl，Percoll,－Nycodenz,－metrizamide作自形成密度梯度離心－二
四）碘鹽自形成梯度：（ Nycodenz或 metrizamide） ??這二種梯度材料在固定角式轉頭或垂直管轉頭，近垂直轉頭離心過程中會用較短的時間就可以自形成密度。??和重金屬鹽一樣，離心力、轉頭種類、離心時間對自形成梯度的形狀都有很大的影響。??由于碘鹽的粘性系數對溫度很敏感，很小的溫升也會因
用－CsCl，Percoll,－Nycodenz,－metrizamide作自形成密度梯度離心－一
用 CsCl，Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度離心一）概述：近年來用重金屬鹽（主要是 CsCl）分離生物大分子的平衡等密度離心；用 Percoll（由瑞典 pharmacia-Biosystems AB開發的膠體硅材料，即在硅顆粒外包覆 PVP塑料
日本勞動安全衛生法目錄新增270個新物質
2013年7月24日，日本厚生勞動省發布聲明：日本勞動安全衛生法(ISHL)目錄中新增270個物質，從而使ISHL目錄下的物質數增加到了62907個。 日本有兩種化學物質名錄，一種是依據《勞動安全衛生法》(ISHL)而制定，而另一種則以《化學品控制法案》(CSCL)為基礎。兩種法規在監管新
RNA－在甲酰胺中的溶解保存
試劑、試劑盒 無水乙醇 異丙醇 的乙醇 甲酰胺 3mol L 的乙酸鈉儀器、耗材 高速離心機 紫外分光光度計實驗步驟 一材料與設備所有的試劑配制均需采用經過蒸餾并消毒的去離子水。1) 無水乙醇2) 異丙醇3)75% 的乙醇4)100% 甲酰胺5)3mol/L 的乙酸鈉6) 高速離心機7) 紫外分光光
連續梯度法純化閉環DNA
實驗概要本實驗介紹了氯化銫-溴化乙錠梯度平衡離心法(即連續梯度法)純化閉環DNA的原理及操作步驟等。實驗原理用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于線性 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。許多年來，純化大量質粒 ?DNA 的首選方法是 CsCl
氯化銫溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA實驗（二）
實驗方法原理通過不連續或預先形成的氯化銫（CsCl）梯度離心，可在離心管中獲得含有不同濃度 CsCl 的溶液分層，樣品位于中層（三級梯度法）或底層（兩級梯度法）。實驗材料粗制質粒試劑、試劑盒CsCl溴化乙錠TE儀器、耗材皮下注射針頭折光儀一次性注射器實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液CsCl ( 固
用有機溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠實驗
欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠，常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠，常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsC
用有機溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠實驗
實驗方法原理 欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠，常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。實驗材料 DNA 樣品試劑、試劑盒 乙醇水飽和的異戊醇或 n-丁醇酚TE儀器、耗材 透析管和夾離心機和轉頭實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液乙醇，水飽和的異戊醇或
“質粒DNA超速離心分離”的補充說明
一）用CSCL-E.B.梯度分離大腸桿菌中質粒DNA、染色體DNA、蛋白質及RNA的詳細步驟（1） 溶液制備：溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，10mM EDTA,25 mM Tris-HCL (PH8.0)。溶液Ⅱ：0.2M NaOH，1%SDS。溶液Ⅲ：3M醋酸鈉（PH4.8）TE緩沖液：10 mM Tr
用有機溶劑抽提法從DNA中除去溴化乙錠實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 欲從經 CsCl 梯度純化的 DNA 中去除溴化乙錠，常用有機溶劑反復抽提的方法。隨后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。 實驗材料 DNA
RNA－在甲酰胺中的溶解保存
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 甲酰胺具有活潑的反應性和特殊的溶解能力，可用作有機合成原料，紙張處理劑，纖維工業的柔軟劑，動物膠的軟化劑，還用作測定大米中氨基酸含量的分析試劑。在有機合成中，醫藥方面的用途居多，在農藥、染料、顏料、香料、助劑方面也有很多用途。也
基因轉染技術的DNA的準備介紹
用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質，無RNA和其它化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上。DNA的質量和純度能影響某些細胞系的轉染效率，可以通過CsCl梯度法或標準柱層析法進行純化。
氯化銫溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA
連續梯度法 不連續梯度法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于與線狀 DNA 和閉環 DN
生物大分子的離心分離實驗（二）
例（3）用CsCl 梯度分離DNA 并測定其組成（% G+C）（i）CsCl 溶液密度D 與溶液中CsCl 的重量百分比濃度P 之間的關系： D=138.11/（137.48-P）（ii） 制備初密度為1.706 克/毫升的梯度液，應按以下要求配置·4.85 克CsCl （分析純）·50μl ，1.
DNA提取中EB的去除實驗方法
Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourn
RNA－在甲酰胺中的溶解保存
將 RNA 保存于甲酰胺中比儲存于水中或乙醇中有更多好處：（1）甲酰胺將保護 RNA 不受 RNA 酶的降解，以這種方式保存的 RNA 是相當穩定的，可以在 4℃ 保存過夜，或在一 20°C 保存相當長的一段時間。樣品甚至可以置于室溫過夜而不用擔心其降解；（2）樣品可被高度濃縮，其終濃度甚至可以達到
CTAB－法從干燥材料中提取DNA的方法
從干燥材料中提取(1)粗提①試劑a.1倍 CTAB 提取緩沖液:2倍 CTAB 貯存液稀釋1倍,使用前每100mL 加入巰基乙醇0.14mL。b.其他試劑與從新鮮材料中提取相同。②操作a.稱取 1g 干燥材料置研缽中,加入3～4g 鋁粉研磨。b.將粉末轉入離心管中,加入0.6～15mL 1倍 CTA