同源重組技術原理
同源重組技術原理:基因敲除鼠技術是上世紀80年代中后期基于DNA同源重組的原理發展起來的,Capecchi和Smithies在1987年根據同源重組(homologous recombination)的原理,首次實現了ES的外源基因的定點整合(targeted integration),這一技術稱為"基因打靶"(gene targeting)或"基因敲除"(gene knockout),利用這種ES的顯微注射就可以制作出基因敲出小鼠(KO Mice: knockout mice);由于這一工作,Capecchi和Smithies于2007年與Evans分享了諾貝爾醫學獎。同源重組(homologous recombination)定義:是指發生在姐妹染色單體(sister chromatin) 之間或同一染色體上含有同源序列的DNA分子之間或分子之內的重新組合。在基因敲除小鼠制作......閱讀全文
雙同源重組報告系統可同時對三種細胞群進行標記示蹤
2019年11月26日,國際學術期刊Journal of Biological Chemistry 在線發表了中國科學院分子細胞科學卓越創新中心/生物化學與細胞生物學研究所周斌研究組的科研成果“Triple-cell lineage tracing by a dual reporter on a
什么酶重組等溫擴增技術?
通過模擬生物體遺傳物質自身擴增復制的原理,將來源于細菌,病毒和噬菌體的特定重組酶、外切酶、聚合酶等多酶體系進行改造突變并篩選其功能,通過不同的核酸擴增反應體系進行優化組合,從而獲得核心的重組等溫擴增體系,建立特殊擴增反應體系,在37-42℃恒溫條件下,可將微量DNA/RNA的特異性區段在數分鐘內擴增
重組DNA技術的基本定義
重組DNA技術是指將一種生物體(供體)的基因與載體在體外進行拼接重組,然后轉入另一種生物體(受體)內,使之按照人們的意愿穩定遺傳并表達出新產物或新性狀的DNA體外操作程序,也稱為分子克隆技術。因此,供體、受體、載體是重組DNA技術的三大基本元件。
CreloxP-基因重組技術
re-loxP 是一種位點特異的基因重組技術,被廣泛應用于特異位點的基因敲除、基因插入、基因翻轉和基因易位,在真核生物和原核生物中均有廣泛應用。Cre-loxP 的基本原理Cre 蛋白是一種重組酶,是causes recombination的縮寫,于1981 年從 P1?噬菌體中被發現,屬于 λIn
重組DNA技術的基本定義
重組DNA技術是指將一種生物體(供體)的基因與載體在體外進行拼接重組,然后轉入另一種生物體(受體)內,使之按照人們的意愿穩定遺傳并表達出新產物或新性狀的DNA體外操作程序,也稱為分子克隆技術。因此,供體、受體、載體是重組DNA技術的三大基本元件。
重組DNA技術的基本定義
重組DNA技術是指將一種生物體(供體)的基因與載體在體外進行拼接重組,然后轉入另一種生物體(受體)內,使之按照人們的意愿穩定遺傳并表達出新產物或新性狀的DNA體外操作程序,也稱為分子克隆技術。因此,供體、受體、載體是重組DNA技術的三大基本元件。
基因重組應用——轉基因技術
基因重組中轉基因技術的理論基礎來源于進化論衍生來的分子生物學。基因片段的來源可以是提取特定生物體基因組中所需要的目的基因,也可以是人工合成指定序列的DNA片段。基因重組DNA片段被轉入特定生物中,與其本身的基因組進行重組,再從重組體中進行數代的人工選育,從而獲得具有穩定表現特定的遺傳性狀的個體。該技
CreloxP-基因重組技術
re-loxP 是一種位點特異的基因重組技術,被廣泛應用于特異位點的基因敲除、基因插入、基因翻轉和基因易位,在真核生物和原核生物中均有廣泛應用。Cre-loxP 的基本原理Cre 蛋白是一種重組酶,是causes recombination的縮寫,于1981 年從 P1 噬菌體中被發現,屬于 λIn
DNA重組技術:酶切、連接
實驗原理: DNA重組技術是用內切酶分別將載體和外源DNA切開,經分離純化后,用鏈接酶將其連接,構成新的DNA分子。限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上,并切割雙鏈DNA。如EcoRⅠ切割識別序列后產生兩個互補的粘性末端。 5’…G↓A
生物安全與重組DNA技術
重組DNA技術涉及到組合不同來源的遺傳信息,從而創造自然界以前可能從未存在過的遺傳修飾生物體(genetically modified organisms,GMOs)。最初,在分子生物學家中有人擔心這些生物體可能具有不可預測的不良性狀,一旦從實驗室逸出將帶來生物學危害。這種擔心在 197
RPA(重組酶聚合酶擴增)技術原理及RPA與LAMP對比
英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術公司。該公司通過突破等溫DNA擴增,開發的重組酶聚合酶擴增ZL技術(RPA),被譽為DNA診斷領域的革命性創新。(http://www.twistdx.co.uk)??????????
基因敲除技術概述(一)
1.概述:基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較成
遺傳發育所減數分裂同源染色體重組機制研究獲新進展
減數分裂過程中同源染色體重組不僅是遺傳多樣性形成所必需的,而且重組形成的交叉,也是同源染色體分別受兩極紡錘絲牽引穩定排列在赤道板上,最終正確分離所必需的。研究表明,兩個不同途徑導致兩種不同類型交叉的形成,一是對干涉敏感的交叉,也稱I型交叉;另一是對干涉不敏感的交叉,也稱II型交叉。
BRCA1BARD1復合物特異識別泛素化核小體促進同源重組修復
DNA雙鏈斷裂(DNA double-strand breaks,DSBs)是真核細胞中最嚴重的DNA損傷類型之一,單個裸露的DSB即可誘發細胞凋亡。DSB主要通過非同源末端連接(NHEJ,non-homologous end-joining)和同源重組(HR,homologous recomb
基因敲除技術
一.概述:基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA 同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較
基因敲除技術
一.概述:基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA?同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較
DNA重組技術的組成部分
上游技術:基因重組、克隆和表達的設計與構建(即DNA重組技術);下游技術:基因工程菌(細胞)的大規模培養、外源基因表達產物的分離純化過程。廣義的基因工程概念更傾向于工程學的范疇。廣義的基因工程是一個高度的統一體:上游重組DNA的設計必須以簡化下游操作工藝和裝備為指導思想;下游過程則是上游重組藍圖的體
CreloxP重組系統技術詳解
Cre-loxP重組系統一.Cre-loxP重組系統作用原理1. Cre重組酶和loxP位點Cre重組酶(Cyclization Recombination Enzyme)由大腸桿菌噬菌體P1的Cre基因編碼,是由343個氨基酸組成的38kD的蛋白質。它不僅具有催化活性,而且與限制酶相似,能夠特異性
簡述多肽藥物的基因重組技術
自然界很多生物都能產生活性多肽,如哺乳動物的胰島素。但從動植物體內提取活性多肽需要大量原料,成本昂貴,不夠綠色環保。利用基因技術生產天然活性多肽解決了這一問題。重組技術是通過將多肽的基因序列構建到載體上,形成重組DNA表達載體,并在原核或真核細胞中進行多肽分子表達、提取、純化。此方法適合制備大于
CreloxP重組系統技術詳解
Cre-loxP重組系統 一.Cre-loxP重組系統作用原理 1. Cre重組酶和loxP位點 Cre重組酶(Cyclization Recombination Enzyme)由大腸桿菌噬菌體P1的Cre基因編碼,是由343個氨基酸組成的38kD的蛋白質。它不僅具有催化活性,
DNA重組(DNA-recombination)技術:工具酶
一、限制性內切酶限制性內切酶(restriction endonucleases,RE)是其中最重要的工具酶之一。它是一類核酸水解酶,能識別和切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列。(一)命名原則限制性內切酶大多從細菌中發現,根據來源進行命名,限制酶的第一個字母(大寫,斜體)為宿主菌的屬名,第二、第三
基因敲除技術簡介
基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較成功的有基因
基因敲除簡介
基因敲除是自80年代末以來發展起來的一種新型分子生物學技術,是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術。通常意義上的基因敲除主要是應用DNA同源重組原理,用設計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術的發展,除了同源重組外,新的原理和技術也逐漸被應用,比較成功的有基因
DNA的重組連接實驗原理和步驟
一、實驗目的 用T4DNA連接酶將載體pBR322 EcoR Ⅰ-CIP處理的DNA片段,與目的基因5.4KbEcoR Ⅰ片段連接起來,構建體外重組DNA分子,同時學習幾種DNA連接的方法。 二、實驗原理 重組的DNA分子是在T4DNA連接酶的作用下,有Mg
重組子的篩選的原理和方法
根據載體 的遺傳特征篩選重組子,如α-互補、抗生素基因等。現在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點(MCS),它并不破壞讀框,但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而
同源域的定義
最初發現的同源異形蛋白的突變可使身體的一部分結構轉變成相似或相關的另一部分,即同源異形現象;產生這種現象的突變稱為同源異形突變,導致同源異形突變的基因稱為同源異形基因,由同源異形框編碼的60個氨基酸殘基稱為同源域。
同源克隆的定義
中文名稱同源克隆英文名稱homologous cloning定 義將一個個體的細胞核植入同一個體的去核的卵母細胞中以此獲得遺傳性質與親本一致的胚胎的技術。應用學科細胞生物學(一級學科),細胞培養與細胞工程(二級學科)
同源物的定義
中文名稱同源物英文名稱homolog定 義從共同始祖分子經趨化或進化而產生的,在序列或結構上存在著相似性的物質。如同源基因、同源蛋白。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),總論(二級學科)
釀酒酵母源Shu復合物在DNA同源重組過程中發揮生物學功能
近日,中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所丁建平研究組的研究成果,以Structural basis for the functional role of the Shu complex in homologous recombination為題,在線發表在《核酸研究》(Nuc
釀酒酵母源Shu復合物在DNA同源重組過程中發揮生物學功能
近日,中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所丁建平研究組的研究成果,以Structural basis for the functional role of the Shu complex in homologous recombination為題,在線發表在《核酸研究》(Nuc