PCR實驗技術（四）
4．我們上面介紹的只是一種基本的PCR反應條件，對于具體的每一種PCR反應，反應條件差異很大，需要根據情況調整。（1）時間：上面介紹的時間適用于在0.2 ml薄壁管進行PCR反應，其反應體積為50 μl，熱循環儀為Perkin-Elmer 9600 或9700、Master Cycler PCR儀（Eppendorf公司）和PTC 100（MJ Research公司）。如PCR的設備和反應體積發生改變，則時間和溫度均需要調整。每一步的時間應從反應混合物達到所需要的溫度后開始計算。一般來說，由混合液原溫度達到所要求溫度的時間需要30-60秒。溫度滯后時間的長短取決于以下幾個因素，包括反應管的類型、反應混合物的體積、熱源（水浴或加熱塊）以及兩個連續步驟間的溫度差。因此調節溫育時間以補償這一滯后時間是非常重要的。兩寡核苷酸引物之間的距離越遠，合成靶序列全長......閱讀全文
實時－PCR－實驗
試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸餾水反向引物正向引物儀器、耗材 ABIPRISM7700 型號系列檢測系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑以 50ul 反應體系為例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitro
實時－PCR－實驗
本方法運用 PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG。進行實時 PCR 時，應該有一套設備可以檢測每次 PCR 循環時釋放的熒光信號。并且還能檢測 FAM 和 JOE 激發后分別釋放出的 520mn 和 550nm 的發射波。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作
PCR實驗操作
PCR實驗操作???? PCR是極為重要的DNA增殖技術，應用層面非常廣，其中包括了核酸探針的制備。如果一段DNA已經被次選殖至載體上，要以PCR擴增這段DNA時，可根據質體multiple cloning sites兩邊的序列，選用適當的核酸引子 （universal primers） 進行擴增反
pcr實驗步驟
一、 樣品RNA的抽提1. 取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以
實時－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸餾水 反向引物 正向引物 儀器
免疫PCR實驗
實驗方法原理 免疫PCR主要由兩個部分組成，第一部分的免疫反應類似于普通的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的測定過程；第二部分即通常的PCR檢測，抗原分子的量最終由PCR產物的多少來反映。第一步中，首先用待測抗原（如牛血清白蛋白（ESA））包被微滴板孔，再加入相應的特異抗體，于是抗體就與固相上的抗原結
雙重PCR實驗
隨著轉基因農作物的大量種植，其安全性問題也日益受到人們的重視。2002年我國要求對轉基因農作物實行標簽管理。抗草甘膦（glyphosate）大豆 （商品名，roundup ready soybean）是在傳統大豆株Variety A5403中轉入外源基因CAMV-35S啟動子、抗草甘膦基因CP4-E
PCR實驗操作
PCR是極為重要的DNA增殖技術，應用層面非常廣，其中包括了核酸探針的制備。如果一段DNA已經被次選殖至載體上，要以PCR擴增這段DNA時，可根據質體multiple cloning sites兩邊的序列，選用適當的核酸引子 （universal primers） 進行擴增反應；比較常用的引子包括S
定量PCR實驗
實驗材料?限制性內切核酸酶反轉錄酶熱穩定 DNA 聚合酶dCTP靶核酸試劑、試劑盒?擴增緩沖液dNTP 貯存液胎盤 RNase 抑制劑儀器、耗材?瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠屏蔽型槍頭離心管正向排液式移液器PCR 儀實驗步驟?一、材料1. 緩沖液與溶液10X 擴增緩沖液4 種 dNTP 貯存液（20
誘變－PCR－實驗
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
誘變－PCR－實驗
試劑、試劑盒?氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色儀器、
PCR實驗技術
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? PCR實驗技術?PCR（聚合酶鏈式反應）?【原理】?PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸
菌落PCR實驗
菌落PCR標簽： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增，省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA測序分析。最后的PCR產物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。
誘變－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突變 PCR 緩沖液
降落PCR實驗
實驗材料 基因樣品儀器、耗材 PCR實驗步驟 1. ?反應體積為50 μl。2. ?人CD137胞膜外區基因的PCR擴增體系：CD137-pCDNA3質粒4 μl，P1，P2各0.5 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。3. ?hIgG1Fc片
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適
反向PCR－（inversePCR）實驗步驟
nverse-PCR是克隆插入片段側翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段。基本步驟如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點側翼DNA序列非常有效的方法。a. 選擇合適的
定量PCR實驗技術－QPCR
Quantitative PCRJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwes
PCR實驗如實預防實驗污染
進行PCR操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，zui大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。1.劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進行：(1)標本
PCR實驗如實預防實驗污染
進行PCR操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。劃分操作區：目前，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進行：(1)標本處理區，
PCR實驗技術（一）
PCR（聚合酶鏈式反應）【原理】PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸鏈（約15-20個核苷酸），用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域；③4種d
多元實時－PCR－實驗
試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸餾水反向引物正向引物儀器、耗材 ABIPrism7700型號系列檢測系統實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑以50ul反應體系為例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen
多元實時－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸餾水 反向引物 正向引物 儀器
PCR實驗技巧2
5. touchdown PCR?原理很簡單,但的確是一個很有用的方法。舉個例子，ANNEALING TEMP. 55度?94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s?72 1min 2cycles 94 30s 58 30s 72 1min
PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染
多元實時－PCR－實驗
多元實時 PCR 時，在一個反應管中加入不同標記的成對引物，從而可以同時分析多個不同的基因。在許多反應中，用 JOE 標記看家基因對模板定量，用 FAM 標記目的基因,證明 LUX 引物非常有效。在標準的多元體系中，使用的引物濃度和加入的體積與進行一元反應時相同，如下。本實驗來源于 PCR 實驗指南
原位PCR實驗步驟
原位PCR實驗步驟，原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬
FDDPCR－實驗
本方案設計為 24 個 PCR 反應，使用 3 種 cDNA 亞群（利用方案 3 中的 H-T11M 引物進行 RT 反應），引物為熒光染料標記的錨定引物（FH-T11M) 與 24 種上游任意引物 (HAP) 的組合。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒cDN
PCRELISA實驗
實驗概要本實驗介紹了PCR-ELISA的操作流程。PCR-ELISA是用免疫學方法檢測PCR產物，這比常規用電泳方法及Southern blot要簡便、省時，可同時處理大量標本，便于自動化。實驗原理PCR-ELISA的原理是在做PCR擴增時應用生物素(biotin)標記的引物，這樣PCR的產物就可結