植物原位接種介導的小麥高效農桿菌轉化方法實驗（一）
試劑、試劑盒 緩釋肥乙酰丁香酮儀器、耗材 盆缽植物支撐器LB 培養基通用型試管YEP 固體培養基TSIM 培養基實驗步驟 一、材料1. 母體植株的生長( 1 ) 將母體植株種植于 12 , 7F ( 直徑為 13 cm) 的盆缽中，每盆 4 株。( 2 ) 用 Levingtons M2 培養土，并施用 5 g/L 奧綠專用緩釋肥（15 : 9 : 9+ 3 MgO + TE；釋放周期達 5~6 個月），并在介質表層鋪一薄層蛭石。( 3 ) 用 Teku 植物支撐器（LBS Horticulture Colne Lancashire, UK) 來支撐植株。( 4 ) 托盤中鋪上 Aquamat ( LBS Horticulture)，每盤放 6 罐（底部寬 30 cm、長 50 cm 的深礫石托盤）。( 5 ) 由 Octamitters 控制澆水。( 6 ) 所使用的生長箱是 C......閱讀全文
農桿菌轉化法的原理
選擇一種特制的空質粒載體（如PBI121質粒載體），其上要求含有T-DNA邊界序列（此處可參見詞條雙元表達載體系統），在序列之間含有復制原點、抗性基因、GUS報告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位點（以上這些構成了一個T-DNA區）。先通過雙酶切反應酶切空質粒載體和目的基因，再通過酶連反應連
關于農桿菌介導法的特點介紹
轉基因技術的飛速發展為生物定向改良和分子育種提供了一種較佳的方法，并使其成為基因工程和育種的最有效途徑，應用較廣泛的轉基因技術有農桿菌介導法、花粉通道法、顯微注射法、基因槍法、離子束介導法等等，其中農桿菌介導法以其費用低、拷貝數低、重復性好、基因沉默現象少、轉育周期短及能轉化較大片段等獨特優點而
農桿菌轉化法培養抗蟲棉
（1）圖中A為基因表達載體；農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據農桿菌的這一特點，在構建基因表達載體時，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．（2）①過程是將基因表達載
小麥的摩擦接種實驗
實驗概要 通過人工摩擦接種方法，學習常規的汁液接種技術。 ? 實驗原理 植物病毒不同于真菌和細菌，屬于被動侵入寄主的類型。在自然界里大多依靠機械摩擦或生物介體完成傳播。故在實驗室中常用病株汁液作為人工接種的材料，將其有效地接種
基因槍法轉化小麥實驗（一）
實驗材料?幼胚盾片試劑、試劑盒?乙醇漂白消毒劑儀器、耗材?誘導培養基實驗步驟 下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小
大腸桿菌轉化實驗——高效率電轉化法
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBSOC儀器、耗材電轉化儀離心機分光光度計實驗步驟1. ?接種一個單菌落于5 ml LB培養液，37℃溫和振搖培養5 h 或過夜。2. ? 將2.5 ml 培養物加人到盛有500 ml LB培養液的2 L 燒瓶中，37℃搖勻振蕩培養至OD600為0.5~0.6。?3.
梨樹農桿菌轉化體系的建立
實驗概要??? 以西洋梨豐產為試材建立農桿菌轉化體系，將抗真菌γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因轉入梨離體葉片獲得了抗病的轉化植株。?主要試劑1. YEB（5.0g/L牛肉胨，5.0g/LDifco Bacto提取物，1.0g/L酵母提取物，5.0g/L蔗糖，15g/L瓊脂，50mg/L卡那霉素，pH值
植物基因轉化技術
相關知識植物基因轉化技術是指將外源基因導入植物細胞或組織，獲得轉基因植物的技術。植物基因轉化技術總體上可分為兩大類：1 以生物體為介導的基因轉移法；2 DNA直接導入法。前者如農桿菌介導法，植物病毒介導法；后者如基因槍法、電擊法、聚乙二醇法、脂質體法及花粉管通道法。其中應用最廣的是根癌農桿菌介導法。
葉盤轉化法
實驗概要本實驗介紹了根癌農桿菌介導的植物轉化－葉盤轉化法的原理及操作步驟。了解根癌農桿菌介導的植物基因轉化的方法和用途，掌握葉盤轉化法的基本原理和操作。實驗原理以根癌農桿菌介導的遺傳轉化是目前最有效的途徑之一。根癌農桿菌對植物釋放的化學物質產生趨化反應，向植物受傷組織集中。經共培養后，受傷部位的化學
農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌感受態的制備和轉化
雙元載體的農桿菌轉化1.1農桿菌感受態細胞的制備1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養。1.1.2. 挑取單菌落接種于5ml YM液體培養基中，220rpm 28℃振蕩培養12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液轉接于100ml YM液體培養基中，
農桿菌感受態的制備和轉化
農桿菌感受態細胞主要用于將目的基因導入植物細胞。實驗方法原理主要原理是通過電擊法或CaCl2、RbCl(KCl)等化學試劑處理，使農桿菌細胞膜的通透性發生暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞。實驗材料農桿菌重組質粒試劑、試劑盒鏈霉素YM液體培養基CaCl2溶液甘油儀器、耗材離心管E
農桿菌感受態的制備和轉化
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要原理是通過電擊法或CaCl2、RbCl(KCl)等化學試劑處理，使農桿菌細胞膜的通透性發生暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞。 實驗材料
制備和轉化感受態大腸桿菌的Hanahan方法實驗（高效的...
制備和轉化感受態大腸桿菌的Hanahan方法實驗（高效的轉化策略）實驗方法原理?20 世紀 70 年代晚期和 80 年代早期，Dong Hanahan 在冷泉港實驗室和哈佛大學做研究生的時候，他做出了以前從未聽說過的轉化效率，并且在以后他的方法被標準化了。實驗材料?質粒 DNA大腸桿菌試劑、試劑盒?
小麥花器官轉化實驗
實驗材料小麥種子 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒壯觀霉素 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?利福平 ? ?
小麥花器官轉化實驗
實驗材料小麥種子試劑、試劑盒壯觀霉素利福平儀器、耗材溫室或走入式生長箱奧綠肥塑料盆LB 培養基MS 培養基解剖鏡巴龍霉素實驗步驟一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麥種子由美國農業部國家種質資源信息中心提供（http: // www .?? ars- grin .
小麥花器官轉化實驗
實驗材料 小麥種子試劑、試劑盒 壯觀霉素利福平儀器、耗材 溫室或走入式生長箱奧綠肥塑料盆LB 培養基MS 培養基解剖鏡巴龍霉素實驗步驟 一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麥種子由美國農業部國家種質資源信息中心提供（http: // www . ? ars-
基因的轉移與重組體的篩選和鑒定2
二、重組DNA分子轉入真核細胞1. 根癌農桿菌Ti質粒介導法農桿菌介導的Ti質粒載體轉化法是目前研究最多、機制最清楚、技術方法最成熟的基因轉化途徑。迄今為止約8096的轉基因植株都是利用農桿菌介導轉化系統獲得的。農桿菌是一類土壤習居菌，革蘭氏染色呈陰性，能感染雙子葉植物和裸子植物，而對絕大多數單子葉
基因槍在棉花轉基因中的優勢
在迄今發展起來的棉花轉基因技術中，農桿菌介導的遺傳轉化應用最為廣泛。自1987年Umbeck等通過農桿菌介導法成功獲得坷字棉轉基因植株后，農桿菌介導法逐漸成為國際上最普遍的轉化手段，并且取得很大進展。中國農科院棉花研究所成功建立了20多個棉花品種的高效、穩定的規模化轉化體系，實現了流水線操作，建立了
優秀！再生基因讓小麥基因工程改良沖破品種限制
“遺傳轉化效率低和基因型依賴性是制約小麥轉基因研究與基因編輯研究及應用的主要障礙，我們的這項工作為解決這一難題提供了方案。”中國農業科學院作物科學研究所（以下簡稱作科所）研究員葉興國對《中國科學報》說。 1月14日，《自然—植物》（Nature Plants）在線發表了作科所作物轉基因及基因編輯
引物介導的原位標記技術實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 中期染色體分裂相 抗地高辛抗體 試劑、試劑盒 三磷酸核苷 Tth 或 Taq DNA 聚
引物介導的原位標記技術實驗
實驗材料 中期染色體分裂相抗地高辛抗體試劑、試劑盒 三磷酸核苷Tth 或 Taq DNA 聚合酶NaClEDTA20 X SSCTween-20乙醇脫脂奶粉（粉末）10 X dNTP反應終止液洗脫液封閉液儀器、耗材 蓋玻片染色缸恒溫裝置實驗步驟 一、標準一步反應PRINS 技術的操作規程有兩套，一套
引物介導的原位標記技術實驗
引物介導的原位標記技術（primed in situ labeling，PRINS) 是一種對細胞及組織的特異 DNA 序列染色的雜交技術，它能夠得到和 FISH 技術相同類型的結果。實驗材料中期染色體分裂相抗地高辛抗體試劑、試劑盒三磷酸核苷Tth 或 Taq DNA 聚合酶NaClEDTA20 X
農桿菌侵染植物相關的注意事項
根癌農桿菌侵染植物是一個非常復雜的過程。根癌農桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會產生一些糖類和酚類物質吸引根癌農桿菌向受傷組織集中。研究證明，主要酚類誘導物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質主要在雙子葉植物細胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根癌農桿菌侵染的原因。還
基因槍法轉化小麥實驗
實驗材料幼胚盾片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?漂白消毒劑 ? ?
基因槍在棉花轉基因中的優勢
在迄今發展起來的棉花轉基因技術中，農桿菌介導的遺傳轉化應用最為廣泛。自1987年Umbeck等通過農桿菌介導法成功獲得坷字棉轉基因植株后，農桿菌介導法逐漸成為國際上最普遍的轉化手段，并且取得很大進展。中國農科院棉花研究所成功建立了20多個棉花品種的高效、穩定的規模化轉化體系，實現了流水線操作，建立了
基因槍在棉花轉基因中的應用
在迄今發展起來的棉花轉基因技術中，農桿菌介導的遺傳轉化應用最為廣泛。自1987年Umbeck等通過農桿菌介導法成功獲得坷字棉轉基因植株后，農桿菌介導法逐漸成為國際上最普遍的轉化手段，并且取得很大進展。中國農科院棉花研究所成功建立了20多個棉花品種的高效、穩定的規模化轉化體系，實現了流水線操作，建立了
根癌農桿菌誘發冠癭瘤現象觀察
一、原理冠癭瘤是根癌農桿菌感染雙子葉植物后形成的一種形似帽狀的瘤組織，該組織能在正常細胞不能生長的無激素培養基上無限制地生長。冠癭瘤的形成，是由于根癌農桿菌Ti質粒上的T－DNA（可轉移DNA，其中含致病和冠癭堿合成酶等基因）整合到宿主植物細胞染色體DNA上的結果。在植物基因工程研究中，以野生型Ti
植物基因轉化常用方法
一. 植物遺傳轉化的方法 植物遺傳轉化技術可分為兩大類：一類是直接基因轉移技術，包括基因槍法、原生質體法、脂質體法、花粉管通道法、電激轉化法、PEG介導轉化方法等，其中基因槍轉化法是代表。另一類是生物介導的轉化方法，主要有農桿菌介導和病毒介導兩種轉化方法，其中農桿菌介導的轉化方法操作簡便、成本低、轉
農桿菌感受態細胞的制備和轉化
實驗概要本實驗介紹了根癌農桿菌GV3101感受態細胞的制備及凍融法轉化。主要試劑利福平，LB培養基，NaCl，CaCl2，YEP培養基，卡那霉素主要設備搖床，高速離心機，低溫冰箱，水浴鍋實驗材料根癌農桿菌GV3101單菌落實驗步驟1. 根癌農桿菌GV3101感受態細胞的制備?? 1) 挑取單菌落GV