盤點：分子診斷常用技術（二）
( 五 ) 生物芯片1991年Affymetrix公司的Fordor利用其所研發的光蝕刻技術制備了首個以玻片為載體的微陣列，標志著生物芯片正式成為可實際應用的分子生物學技術。時至今日，芯片技術已經得到了長足的發展，如果按結構對其進行分類，基本可分為基于微陣列( microarray) 的雜交芯片與基于微流控( microfluidic) 的反應芯片2 種。1.微陣列芯片( 1 ) 固相芯片: 微陣列基因組DNA 分析( microarray-based genomic DNAprofiling，MGDP) 芯片: 將微陣列技術應用于MGDP 檢測中已有超過十年的歷史，其技術平臺主要分為2 類，即微陣列比較基因組雜交( array-based comparative genomehybridization，aCGH) 和基......閱讀全文
盤點：分子診斷常用技術（二）
(?五 )?生物芯片1991年Affymetrix公司的Fordor利用其所研發的光蝕刻技術制備了首個以玻片為載體的微陣列，標志著生物芯片正式成為可實際應用的分子生物學技術。時至今日，芯片技術已經得到了長足的發展，如果按結構對其進行分類，基本可分為基于微陣列( microarray)?的雜交芯片
盤點：分子診斷常用技術（一）
分子診斷技術即是利用分子生物學方法對人類及病原體的各類遺傳物質進行檢測，以幫助對疾病進行診斷。以技術原理出發對分子診斷技術進行歸類與評價，以對目前臨床常用技術的沿革進行回顧。1961年Hall 建立的液相分子雜交法標志著人類掌握分子生物學技術對特定核酸序列進行檢測，開啟了對疾病分子診斷的大門。1
分子診斷常用技術（二）
( 五) 生物芯片1991 年Affymetrix 公司的Fordor利用其所研發的光蝕刻技術制備了首個以玻片為載體的微陣列，標志著生物芯片正式成為可實際應用的分子生物學技術。時至今日，芯片技術已經得到了長足的發展，如果按結構對其進行分類，基本可分為基于微陣列( microarray) 的雜交芯片與
－盤點：分子診斷常用技術50年的沿革與進步
一、基于分子雜交的分子診斷技術 上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發展最為迅猛的20年，由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增，人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現，為基于分子雜交的體外診斷方法進行了
分子診斷技術大盤點
分子診斷技術盤點分子診斷技術是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學技術通過檢測基因的存在、缺陷或表達異常，從而對人體狀態和疾病作出診斷的技術。分子診斷技術為疾病的預測、診斷、預防、治療和轉歸提供了信息和決策依據，已廣泛應用于傳染病的診斷、流行病的調查、食品衛生檢查、腫瘤和遺傳病的早期診斷及法醫
現有分子診斷技術大盤點
感染性疾病如今出現了很多新的變化，舊的疾病有了新的特點，也出現了諸如埃博拉病毒之類新的疾病。傳統的病原學檢測以分離、培養、染色、生物化學鑒定為主，但是有操作復雜、檢測周期長、干擾因素多、敏感性與特異性有限等缺點。雖然自動化技術縮短了檢測時間，但并沒有解決根本性問題，臨床應用中急需一種新的，更有效的診
一文讀懂分子診斷常用技術（二）
二核酸序列測定測序反應是直接獲得核酸序列信息的唯一技術手段,是分子診斷技術的一項重要分支。雖然分子雜交、分子構象變異或定量PCR技術在近幾年已得到了長足的發展,但其對于核酸的鑒定都僅僅停留在間接推斷的假設上,因此對基于特定基因序列檢測的分子診斷,核酸測序仍是技術上的金標準。(一)第1代測序1975年
分子診斷常用技術（三）
二、核酸序列測定測序反應是直接獲得核酸序列信息的唯一技術手段，是分子診斷技術的一項重要分支。雖然分子雜交、分子構象變異或定量PCR 技術在近幾年已得到了長足的發展，但其對于核酸的鑒定都僅僅停留在間接推斷的假設上，因此對基于特定基因序列檢測的分子診斷，核酸測序仍是技術上的金標準。( 一) 第1 代測序
分子診斷常用技術（一）
分子診斷技術即是利用分子生物學方法對人類及病原體的各類遺傳物質進行檢測，以幫助對疾病進行診斷。以技術原理出發對分子診斷技術進行歸類與評價，以對目前臨床常用技術的沿革進行回顧。1961 年Hall 建立的液相分子雜交法標志著人類掌握分子生物學技術對特定核酸序列進行檢測，開啟了對疾病分子診斷的大門。19
漫談分子診斷常用技術沿革
一、基于分子雜交的分子診斷技術 上世紀60年代至80年代是分子雜交技術發展最為迅猛的20年,由于當時尚無法對樣本中靶基因進行人為擴增,人們只能通過已知基因序列的探針對靶序列進行捕獲檢測。其中液相和固相雜交基礎理論、探針固定包被技術與cDNA探針人工合成的出現,為基于分子雜交的體外診斷方法進行了最初
CRISPR分子診斷技術（二）
6 ?? Sherlock和Mammoth兩家公司的技術并非橫空出世，而是源于張鋒和Doudna兩家實驗室于2015-2018年期間在知名期刊上發表的一系列科研成果。這場學術上的比拼猶如兩個武林高手過招，精彩紛呈，讓人目不暇接。兩個團隊互相競爭，也互相學習，開拓了CRISPR分子診斷這一全新
一文讀懂分子診斷常用技術
基于分子構象的分子診斷技術 (一)變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)與單鏈構象多態性(single strand conformation polymorphism,SSCP) 1970~1980年間,Fischer等
盤點質譜儀常用進樣技術
將樣品導入質譜儀可分為直接進樣和通過接口兩種方式實現。 1.直接進樣 在室溫和常壓下，氣態或液態樣品可通過一個可調噴口裝置以中性流的形式導入離子源。吸附在固體上或溶解在液體中的揮發性物質可通過頂空分析器進行富集，利用吸附柱捕集，再采用程序升溫的方式使之解吸，經毛細管導入質譜儀。 對于固體樣
一文讀懂分子診斷常用技術（一）
分子診斷技術是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學技術通過檢測基因的存在、缺陷或表達異常，從而對人體狀態和疾病作出診斷的技術。其基本原理是檢測DNA或RNA的結構是否變化、量的多少及表達功能是否異常，以確定受檢者有無基因水平的異常變化，對疾病的預防、預測、診斷、治療和預后具有重要意義。通俗簡單
漫談分子診斷技術50年（二）
二、核酸序列測定 測序反應是直接獲得核酸序列信息的唯一技術手段,是分子診斷技術的一項重要分支。雖然分子雜交、分子構象變異或定量PCR技術在近幾年已得到了長足的發展,但其對于核酸的鑒定都僅僅停留在間接推斷的假設上,因此對基于特定基因序列檢測的分子診斷,核酸測序仍是技術上的金標準。 (一)第1代
分子克隆常用技術
一、核酸的純化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的純化。其關鍵步驟是去蛋白質，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每當需要把克隆有某一些所用的酶滅活或去除以便進行下一步時，可進行這種抽提。然而，如要從細胞裂解液等復雜的分子混合物中純化核酸，則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質后
分子生物學常用實驗技術（二）
第三節操作步驟 一、細菌的培養和收集 將含有質粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24 小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12 小時至對數生長后期。 二、質粒D
常用食品分析與安全檢測技術盤點
近年來，危及到人類身體健康、生命安全的各種食品安全問題層出不窮，比如瘋牛病、蘇丹紅以及瘦肉精和奶粉中的三聚氰胺事件,一時間各種食品安全問題令人防不勝防,因此對食品安全問題、檢測技術分析,具有非常重大的現實意義。 食品分析與安全檢測技術作為食品質量安全管理體系的技術支撐，是國家開展食品安全監測、
金屬和合金微觀分析常用技術盤點
一種金屬或合金的性能取決于其本身的兩個屬性：一個是它的化學成分，另一個是它內部的組織結構。所以，對金屬材料的成分和組織結構進行精確表征是金屬材料研究的基本要求，也是實現性能控制的前提。材料分析的內容主要包括形貌分析、物相分析、成分分析、熱性能分析、電性能分析等。本文就金屬材料的形貌分析、物相分析
常用的分子生物學基本技術（二）
載體 所謂載體是指攜帶靶DNA片段進入宿主細胞進行擴增和表達的工具。細菌質粒?是一種細菌染色體外小型雙鏈環狀結構的DNA，分子大小為1-20kb，對細菌的某些代謝活動和抗藥性表型具有一定的作用。質粒載體是在天然質粒的基礎上人工改造拼接而成。最常用的質粒是pBR322。噬菌體（phaeg）?噬菌體是感
常用的分子生物學基本技術（二）
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯酰胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象，一個堿基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構，這種二級結構依賴于其堿基組成，即使一個堿基的不同，也會形成不同的二
常用基因診斷技術
?? 當細胞的基因組DNA用特定的內切酶如Eco RⅠ切割時，凡有GAATTC的地方都被切開，得到許多長度一定但互不相等的片段，需要分析、分離的基因或DNA片段就在其中某一特定的的片段上。 然而許多長短不同的DNA片段混合在一起是很難分析的。因此首先必需將它們按大小（長短)分離開來，這可借助凝膠電
分子診斷技術、PCR技術、基因測序技術的區別、原理（二）
二、核酸序列測定 測序反應是直接獲得核酸序列信息的唯一技術手段,是分子診斷技術的一項重要分支。雖然分子雜交、分子構象變異或定量PCR技術在近幾年已得到了長足的發展,但其對于核酸的鑒定都僅僅停留在間接推斷的假設上,因此對基于特定基因序列檢測的分子診斷,核酸測序仍是技術上的金標準。 (一)第1代
分子生物學實驗診斷技術（二）
（三）Northern blot用于RNA分析，電泳條件與轉膜方法與Southern blot不同外，RNA不必變性與中和，電泳時加電醛防止RNA發夾結構形成。其它步驟相同。為了防止RNase水解需分析的mRNA，盡可能將器皿在160-180℃干熱滅菌8小時以上，也可加0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC
分子克隆（molecular－coloning）常用技術
一、核酸的純化在分子克隆 的所有操作中，最基本的操作是核酸的純化。其關鍵步驟是去蛋白質，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每當需要把克隆 有某一些所用的酶滅活或去除以便進行下一步時，可進行這種抽提。然而，如要從細胞裂解液等復雜的分子混合物中純化核酸，則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白
基因診斷的常用技術
綜述當細胞的基因組DNA用特定的內切酶如Eco RⅠ切割時， 基因診斷凡有GAATTC的地方都被切開，得到許多長度一定但互不相等的片段，需要分析、分離的基因或DNA片段就在其中某一特定的的片段上。 然而許多長短不同的DNA片段混合在一起是很難分析的。因此首先必需將它們按大小（長短）分離開來，這可借助
分子雜交技術（二）
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
分子雜交技術（二）
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
CRISPR分子診斷技術（一）
本篇為“連環畫”系列中的第二篇。“連環畫”中的每一篇都會介紹一個最新生物醫藥技術或趨勢。以圖畫為主，文字為輔。雖然無法做到系統全面，但希望能給讀者帶來一些啟發。每篇文章只代表作者個人的觀點或解讀，與禮來亞洲基金的投資決定無關。1 ???脊椎動物的免疫系統分為先天免疫（或非特異性免疫），和獲得性免疫（
CRISPR分子診斷技術（五）
25 ? DETECTR達到了aM水平的靈敏度和≤7個堿基的特異性。例如，它能準確地檢測出受試者攜帶的是哪種亞型的HPV。圖片來源：參考資料2和1026 ??在同期Science論文中，張鋒團隊從三個方面著手完善SHERLOCK：多重化、定量化和去熒光。先說多重化：他們挑選了來自兩個不同菌株的Cas