RNA干擾的發現與研究
RNAi是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA(antisense RNA)的過程中發現的,由dsRNA介導的同源RNA降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA(sense RNA)和反義RNA均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par-1基因的表達,該結果不能使用反義RNA技術的理論做出合理解釋。直到1998年,Fire等證實Guo等發現的正義RNA抑制同源基因表達的現象是由于體外轉錄制備的RNA中污染了微量dsRNA而引發,并將這一現象命名為RNAi。此后dsRNA介導的RNAi現象陸續發現于真菌、果蠅、擬南芥、錐蟲、水螅、渦蟲、斑馬魚等多種真核生物中,并逐漸證實植物中的轉錄后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)、共抑制(cosuppression)及RNA介導的病毒抗性、真菌的抑制(quelling)現象均屬于RNAi在不同物種的表現形式。19......閱讀全文
RNA干擾的發現與研究
RNAi是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA(antisense RNA)的過程中發現的,由dsRNA介導的同源RNA降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA(sense RNA)和反義RNA均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par-1基因的表達,該結果不能使用反義RN
RNA干擾的發現背景
RNAi是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA(antisense RNA)的過程中發現的,由dsRNA介導的同源RNA降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA(sense RNA)和反義RNA均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par-1基因的表達,該結果不能使用反義RN
關于RNA干擾的發現介紹
RNAi是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA(antisense RNA)的過程中發現的,由dsRNA介導的同源RNA降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA(sense RNA)和反義RNA均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par-1基因的表達,該結果不能使用反義
RNA干擾技術的發現歷史
RNAi是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA(antisense RNA)的過程中發現的,由dsRNA介導的同源RNA降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA(sense RNA)和反義RNA均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par-1基因的表達,該結果不能使用反義RN
關于小干擾RNA的發現介紹
siRNA最早是由英國的大衛·包孔博(David Baulcombe)團隊發現,是植物中的轉錄后基因沉默(post-transcriptional gene silencing;PTGS)現象的一部分,其研究結果發表于《科學》。2001年,湯瑪士·涂許爾(Thomas Tuschl)團隊發現合成
RNA干擾的分子機制首次被發現
日本東京大學官網近日宣布,東京大學和京都大學研究人員發現了核糖核酸干擾(RNAi)的分子機制。所謂核糖核酸干擾,就是單分子RNA分裂時出現的某種蛋白質合成受到抑制的現象。 由于借助RNAi可以關閉特定基因的表達,科學家一直期待RNAi現象在醫療領域得到應用。在先前研究中,科學家已經發現RNAi
基因敲除與RNA干擾的關系
20世紀80年代初,胚胎干細胞分離和體外培養的成功為基因敲除奠定了技術基礎。1985年,首次證實的哺乳動物細胞中同源重組(homology recombination, HR)的存在為基因敲除奠定了理論基礎[2]。為了編輯基因,傳統的靶向特定等位基因的同源重組技術被使用,但是,這個方法在當年來說,存
新研究發現與心臟衰老有關的RNA片段
研究人員在新一期英國《自然》雜志發表報告說,他們通過動物實驗發現一種與心臟衰老有關的核糖核酸(RNA)片段,這一成果有望為心血管疾病的防治提供新思路。 德國法蘭克福大學的研究人員說,衰老導致的心臟細胞減少和心臟功能減退是引發心血管疾病的重要原因,而一個被稱為“miR-34a”的短RNA片段
RNA干擾的簡介
RNAi研究取得了突破性進展,被《Science》雜志評為2001年的十大科學進展之一,并名列2002年十大科學進展之首。由于使用RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達,所以該技術已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領域。
RNA干擾的概念
RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默,主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類:TGS是指由于DNA修
RNA干擾的特點
1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也證實
RNA干擾的概念
RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默,主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類:TGS是指由于DNA修
RNA干擾的定義
RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。
RNA干擾(RNAi)實驗原理與方法(3)
3.DEAE-葡聚糖和polybrene帶正電的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚體復合物和帶負電的DNA分子使得DNA可以結合在細胞表面。通過使用DMSO或甘油獲得的滲透休克將DNA復合體導入。兩種試劑都已成功用于轉染。DEAE-葡聚糖僅限于瞬時轉染。4.機械法轉染技術也包括使用機械的方法,
RNA干擾(RNAi)實驗原理與方法(2)
dsRNA消化法的主要優點在于可以跳過檢測和篩選有效siRNA序列的步驟,為研究人員節省時間和金錢(注意:通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜)。不過這種方法的缺點也很明顯,就是有可能引發非特異的基因沉默,特別是同源或者是密切相關的基因。現在多數的研究顯示這種情況通常不會造成影響。最
RNA干擾(RNAi)實驗原理與方法(1)
近年來的研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發生特異性的降解,導致其相應的基因沉默。這種轉錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾(RNAi)。一、R
干擾素的發現與應用
1935年,美國科學家用黃熱病毒在猴子身上做試驗。黃熱病是一種由病毒引起的惡性病。這種人和猴子都會得的病有幾種類型。他們先用一種致命性弱的病毒感染猴子,猴子安然無恙,可是再用致病性很強的黃熱病毒染同一只猴子,猴子竟然沒有反應。這一現象使美國科學家得到啟發:前一種病毒可能產生了某種物質,使細胞受新病毒
RNA干擾技術(RNA-interference,RNAi)
1995年,康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲(C. elegans)中的par-1基因時,發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達,而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA(sense RNA)以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果
RNA干擾技術的特點
1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也證實
概述RNA干擾的特點
1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也
RNA干擾現象的概念
RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。
RNA干擾的作用機制
病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內,并利用宿主細胞進行轉錄時,常產生一些dsRNA。宿主細胞對這些dsRNA迅即產生反應,其胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA(大約21~23 bp),即siRNA。siRNA在細胞內R
簡述RNA干擾的特征
①RNAi是轉錄后水平的基因沉默機制; ②RNAi具有很高的特異性,只降解與之序列相應的單個內源基因的mRNA; ③RNAi抑制基因表達具有很高的效率,表型可以達到缺失突變體表型的程度,而且相對很少量的dsRNA分子(數量遠遠少于內源mRNA的數量)就能完全抑制相應基因的表達,是以催化放大的
RNA干擾現象的特點
1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也證實
RNA干擾的作用機制
病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內,并利用宿主細胞進行轉錄時,常產生一些dsRNA。宿主細胞對這些dsRNA迅即產生反應,其胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA(大約21~23 bp),即siRNA。siRNA在細胞內R
RNA干擾的作用機制
病毒基因、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內,并利用宿主細胞進行轉錄時,常產生一些dsRNA。宿主細胞對這些dsRNA迅即產生反應,其胞質中的核酸內切酶Dicer將dsRNA切割成多個具有特定長度和結構的小片段RNA(大約21~23 bp),即siRNA。siRNA在細胞內R
關于小干擾RNA的RNA激活介紹
已經發現dsRNA還可以激活基因表達,這種機制被稱為“小RNA誘導的基因激活”或RNAa。已經顯示靶向基因啟動子的dsRNA誘導相關基因的有效轉錄激活。使用合成的dsRNA在人細胞中證明RNAa,稱為“小活化RNA”(saRNA)。尚不清楚RNAa是否在其他生物體中是保守的。
RNA干擾主體實驗
siRNA表達載體構建好后,即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于:成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低(低于70%),則應采用腺病毒或慢病毒載體,利用病毒載體的高感染率、高表達特性,更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準
RNA干擾功能特點
1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也證實
RNA干擾回復實驗
RNA干擾回復實驗,主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects(脫靶效應)最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce