RNA聚合酶的基本介紹
RNA聚合酶（RNA polymerase）：以一條DNA鏈或RNA為模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。 催化轉錄的RNA聚合酶是一種由多個蛋白亞基組成的復合酶。如大腸桿菌的 RNA聚合酶有五個亞基組成，其分子量為480000，含有α，β，β’，σ，ω等5種不同的多肽，其中α為兩個分子，所以全酶（holoenzyme）的組成是α2ββ’σω。σ亞基與RNA聚合酶的四聚體核心（α2ββ’）的形成有關；β亞基與起始和催化聚合反應有關；β’亞基含有與DNA模板的結合位點；而σ因子只與RNA轉錄的起始有關，與鏈的延伸沒有關系，一旦轉錄開始，σ因子就被釋放，而鏈的延伸則由四聚體核心酶（core enzyme）催化。所以，σ因子的作用就是識別轉錄的起始位置，并使RNA聚合酶結合在啟動子部位；ω亞基作用暫不明確。 細菌的RNA聚合酶，像DNA聚合酶一樣，具有很復雜的結構。其活性形式（全酶）為15S，由5種不同的多肽鏈構成，按......閱讀全文
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗
實驗方法原理 含有 pT7 控制的外源基因（「痘苗病毒系統基因表達實驗」中「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA
T7RNA聚合酶的基本信息
T7RNA聚合酶具有高度啟動子專一性，且只會轉錄T7噬菌體中位于T7啟動子下游的的DNA或DNA復制品。此酶在合成RNA的過程中，需要DNA模板與鎂離子（Mg2+）作為輔因子。牛血清蛋白（bovine serum albumin，BSA）及精胺（spermidine）對此酶具促進效果。與細菌的RNA
從－PEI－沉淀洗脫σ32－和－RNA－聚合酶實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的緩沖液 A 儀器、耗材
T7RNA聚合酶的基本信息
T7RNA聚合酶具有高度啟動子專一性，且只會轉錄T7噬菌體中位于T7啟動子下游的的DNA或DNA復制品。此酶在合成RNA的過程中，需要DNA模板與鎂離子（Mg2+）作為輔因子。牛血清蛋白（bovine serum albumin，BSA）及精胺（spermidine）對此酶具促進效果。與細菌的RNA
從－PEI－沉淀洗脫σ32－和－RNA－聚合酶實驗
試劑、試劑盒 緩沖液 A 含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol LNaCl 的緩沖液 A儀器、耗材 SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠實驗步驟 材料與設備SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%)試劑緩沖液 A含 0、0.3、0.5、0.7、0.9 和 1.1mol
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗
兩種重組痘苗病毒共感染細胞 單病毒感染OST7-1細胞 利用VOTE系統 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 含有 pT7 控制的外源基因（「痘苗病毒系統基
3類不同的RNA聚合酶的功能介紹
真核細胞含有3類不同的RNA聚合酶,根據其對α-鵝膏蕈堿的敏感性不同,分為RNA聚合酶Ⅰ(A)、RNA聚合酶Ⅱ(B)、RNA聚合酶Ⅲ(C),如下:酶的種類存在功能對抑制物的敏感性RNA聚合酶Ⅰ核仁合成rRNA前體不敏感RNA聚合酶Ⅱ核質合成mRNA前體及大多數snRNA敏感RNA聚合酶Ⅲ核質合成5S
RNA聚合酶復合物晶體結構獲解析
中科院武漢病毒所研究員龔鵬帶領研究小組解析了RNA病毒基因組復制和轉錄中重要物質——RdRP轉位中間體的晶體結構。這將為相關抗病毒研究提供重要依據。相關成果日前發表于美國《國家科學院院刊》。 核酸聚合酶是核酸生物合成的分子機器，也是實現核酸遺傳信息復制和傳遞的關鍵蛋白。在模板序列的指導下，聚合
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑（Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物，操作時應穿實驗服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 處理的水
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（三）
實驗方法原理VOTE是最近發展的痘苗病毒/T7 RNA聚合酶混合表達系統，將外源基因克隆到質粒 pVOTE. 1或 pVOTE. 2 中，通過同源重組將其整合到痘苗病毒 vT7lacOI 基因組中，制備重組病毒儲液。在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）存在的條件下，用重組病毒感染細胞，外源基因
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗
基本方案 備選方案 備選方案2 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 載體 試劑、
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗
實驗材料 載體試劑、試劑盒 氨芐青霉素卡那霉素pGP裂解緩沖液儀器、耗材 培養箱分光光度計離心機實驗步驟 1. ?將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化一種標準大腸桿菌菌株，此菌株不應帶有可指導T7 RNA聚合酶合成的質粒。轉化物涂布于氨芐青霉素平皿，于37℃溫育培養
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗
差異顯示聚合酶鏈反應（PCR) 可促進在諸多物種中與污染暴露相關的新分子標志物的鑒定。至今，已有多種差異顯示方法被詳細描述。這里，我們描述了一種改良的RNA 隨機引物觸發的 PCR 方 法（RNAarbitrarily primed PCR， RAP-PCR) , 主要涉及通過 羅 丹 明（rhod
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（二）
單病毒感染OST7-1細胞實驗方法原理OST7-1 細胞來源于鼠 L929 細胞，能在細胞質中持續表達噬菌體 T7 RNA 聚合酶，因此，應用此細胞系無需用 vTF7-3 感染細胞。實驗材料貼壁培養的單層 OST7-1 細胞含有 pT7 控制的外源基因的重組病毒儲液試劑、試劑盒完全 MEM-2.5
T7RNA聚合酶系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體T7 RNA聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于T7 RNA聚合酶啟動子（PT7）的控制下。在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA聚合酶轉錄。這種轉染方案適用于分析的目的，因為不需要構建新的重組病毒，所以比較簡單。對于大規
我國科學家發現RNA病毒聚合酶獨特催化機制
RNA病毒包括SARS冠狀病毒、高致病性流感病毒、埃博拉病毒、寨卡病毒等，在過去十五年間多次造成全球性影響，對人類健康構成嚴重威脅，而針對RNA病毒的藥物和疫苗目前嚴重匱乏。聚合酶作為RNA病毒所必需的復制酶，在病毒RNA基因組復制過程中發揮核心作用，深入了解其催化機制，將為有效應對RNA病毒提
我國科學家發現RNA病毒聚合酶獨特催化機制
RNA病毒包括SARS冠狀病毒、高致病性流感病毒、埃博拉病毒、寨卡病毒等，在過去十五年間多次造成全球性影響，對人類健康構成嚴重威脅，而針對RNA病毒的藥物和疫苗目前嚴重匱乏。聚合酶作為RNA病毒所必需的復制酶，在病毒RNA基因組復制過程中發揮核心作用，深入了解其催化機制，將為有效應對RNA病毒提
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗（一）
實驗步驟 ##一、 從組織和培養細胞中分離RNA1.TRIzol試 劑（Invitrogen)。該試劑含有苯酚和硫氰酸鹽化合物，操作時應穿實驗服，戴手套，存放于 4°C 。2.氯仿。3.異丙醇。4.乙醇。5.焦炭酸二乙酯（DEPC) 處理的水。6.無DNA試劑盒（Ambion)。貯存于一 20°C
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗1
在適宜的條件下，T7 RNA聚合酶/啟動子系統表達的基因產物可占細胞總蛋白的25%以上，但多數情況下產量比這個比例要低得多。實驗材料載體試劑、試劑盒氨芐青霉素卡那霉素pGP裂解緩沖液儀器、耗材培養箱分光光度計離心機實驗步驟1. ?將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化
MCB：RNA聚合酶III調控巨噬細胞功能促進腫瘤存活
近日，來自英國的科學家在生物學期刊Molecular and Cellular Biology在線發表了他們關于RNA聚合酶III調控巨噬細胞功能的最新研究進展。 研究人員指出，腫瘤微環境中的炎癥具有許多促癌癥發展效應。特別是腫瘤相關巨噬細胞（TAM）能夠產生許多細胞因子，促進惡性腫瘤細胞存活
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗3
實驗材料噬菌體試劑、試劑盒PEGIPTG儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. ?制備從M13噬菌體mGP1-2原種，加PEG溶液沉淀濃縮噬菌體。重懸噬菌體于M9培養基，滴定其滴度。?2. ?將由“基本方案”步驟1所得的含T7 啟動子表達質粒轉化M13許可性大腸桿菌細胞，轉化物涂布于氨芐青霉素平皿上，3
熒光RNA隨機引物觸發的聚合酶鏈反應實驗（二）
##六、從組織或培養細胞提取 RNARNA可以從各種來源的樣本包括培養的細胞（例如神經元細胞、肝細胞等）和組織中分離得到（見 注 釋 1) 。 mRNA 的 純 化 對 FRAP-PCR 方法來說并不需要，因為mRNA 僅占細胞總 R N A 的 3 % ?5 % (13)。因而在本章所描述
Nature－Microbiology：流感病毒聚合酶調控RNA合成機制
流感病毒是危害全球公共衛生健康的重要病原之一，能在人群中引起大規模流行和季節性流感，每次暴發都會引起人類死亡并造成巨大的經濟損失。流感病毒（Influenza virus）是分節段的負鏈RNA病毒（Segmented Negative-Sense RNA virus, sNSV），屬于正粘病毒科
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗2
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒氨基酸混合物M9培養基甲硫氨酸甲醇儀器、耗材熒光顯微鏡離心機分光光度計實驗步驟1. ?將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化一種標準大腸桿菌菌株，此菌株不應帶有可指導T7 RNA聚合酶合成的質粒。轉化物涂布于氨芐青霉素平皿，于37℃溫育培養過
研究發現鞘磷脂能夠激活丙型肝炎病毒RNA聚合酶
HCV聚合酶的鞘磷脂結合結構域 10月，病毒研究領域著名學術期刊Journal of Virology在線發表了中科院上海巴斯德所最新研究成果，該研究揭示了作為脂筏主要結構成分之一的鞘磷脂能夠以基因型特異性的方式激活丙型肝炎病毒（HCV）1b亞型的RNA聚合酶，并且找到了其結合和激
Nature：重磅！抑制RNA聚合酶III可延長壽命
在一項新的研究中，來自英國倫敦大學學院、肯特大學和荷蘭格羅寧根大學的研究人員發現抑制一種所有動物都擁有的酶的活性可延長果蠅和線蟲的壽命。相關研究結果于2017年10月29日在線發表在Nature期刊上，論文標題為“RNA polymerase III limits longevity downs
三域生物RNA聚合酶“最后一塊拼圖”被補上
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/518213.shtm2016年1月，回國不滿半年的張余，在《中國科學院分子植物科學卓越創新中心人員遴選申請書》里寫到：“申請人擬開展的工作是運用結構生物學研究葉綠體編碼的RNA聚合酶（PEP）的工作機理和
抑制RNA聚合酶就能延長壽命！請看Nature最新文章
倫敦大學學院UCL領導的研究發現：果蠅和線蟲的壽命可以通過對一種在動物身上很普遍的酶的活性進行限制而延長。相關研究于11月29日在線發表在Nature上。 這一文章揭示：酵母細胞的存活期、果蠅及線蟲的壽命可以在機體成年后將RNA聚合酶III（Pol III）的活性略微削減而延長平均10%。
抑制RNA聚合酶就能延長壽命！請看Nature最新文章
這一文章揭示：酵母細胞的存活期、果蠅及線蟲的壽命可以在機體成年后將RNA聚合酶III（Pol III）的活性略微削減而延長平均10%。 第一作者Danny Filer說：“我們已經發現了Pol III在成年果蠅及線蟲中的一個基本作用：它的活動對干細胞功能、腸道健康和動物的生存產生了負面影響。當
研究解析新冠病毒RNA聚合酶三維精細結構
由饒子和院士/婁智勇教授/王權教授等組成的“上海科技大學-清華大學抗新冠病毒聯合攻關團隊”率先在國際上成功解析了新型冠狀病毒轉錄復制機器核心單元“RdRp-nsp7-nsp8”復合體的三維空間結構，整體分辨率達到2.9 埃（?）。 該研究揭示了該病毒遺傳物質轉錄復制機器核心“引擎”的結構特征，