實驗路線
（1）LINC00346調控胃癌發展的上游機制
結果：轉錄因子KLF5和MYC可與LINC00346啟動子結合，并增強其表達
a. 轉錄因子MYC、KLF5和 LINC00346的Oncoprint分析；b. 在含有或未含有胃癌KLF5/ MYC / LINC00346 SCNAs的轉錄因子KLF5、MYC、LINC00346基因表達；c. GSE51705數據庫的分析顯示，KATO-III GC細胞中KLF5與LINC00346基因啟動子結合；d. UCSC基因組生物信息學網站顯示， MYC高度富集在LINC00346的啟動子上；e. GSE51575數據庫顯示LINC00346的表達與KLF5或MYC正相關；f. qPCR顯示LINC00346的表達與KLF5或MYC 正相關；g. ChIP實驗顯示，內源性MYC和KLF5與LINC00346基因啟動子區結合。h. WB顯示干擾或過表達LINC00346后，KLF5和MYC蛋白表達情況；i. 雙熒光報告實驗檢測LINC00346啟動子片段與KLF5或MYC直接結合
（2）LINC00346調控胃癌發展的下游機制
結果1：GSEA和GO分析LINC00346高/低表達胃癌患者和細胞
a. GSEA分析GSE65801數據中比較LINC00346高/低后差異基因的富集信號通路； b. 熱圖顯示胃癌中過表達LINC00346后的差異基因；c. GO分析差異基因的富集情況；d,e. qPCR和WB篩選腫瘤相關的差異基因。
結果2：LINC00346通過調節Notch1、CD44和AXL促進胃癌細胞增殖和侵襲
a.IHC分析腫瘤組織和腫瘤肺轉移組織中Notch1, CD44, 和AXL的表達；b. qPCR檢測胃癌發生或未發生淋巴結轉移組織中Notch1, CD44, 和AXL的表達；c. IHC檢測胃癌發生或未發生淋巴結轉移組織中Notch1, CD44, 和AXL的表達；d. WB檢測胃癌細胞中Notch1, CD44, 和AXL的蛋白表達；e,f. Transwell實驗檢測Notch1, CD44 或 AXL對LINC00346侵襲功能的挽救能力；g. MTT和h.克隆形成實驗檢測Notch1, CD44 或 AXL對INC00346增殖功能的挽救能力。
結果3：LINC00346通過與miR-34a-5p相互作用調控Notch1、CD44和AXL
a. LINC00346和miRNA結合位點的預測；b. MS2-RIP實驗驗證LINC00346能夠拉下的miRNAs；c. pull-down實驗驗證LINC00346吸附的miRNAs；d. 雙熒光報告基因實驗miR-34a與LINC00346直接結合；e. AGO2 RIP實驗驗證miR-34a能夠拉下LINC00346；f. WB顯示miR-34a能夠挽救LINC00346對Notch1, CD44 或 AXL的蛋白水平的調節；g. Tranwell實驗顯示miR-34a能夠挽救LINC00346對胃癌細胞遷移和侵襲能力的調節；h. 雙熒光報告基因實驗顯示miRNA能與Notch1, CD44 或 AXL基因的3‘UTR直接結合； i. 原位雜交實驗顯示LINC00346和miR-34a能夠共定位在細胞質中。
總結
本研究通過生物信息學分析、功能實驗和分子機制探究實驗技術揭示了胃癌發展中一個潛在的新機制：在胃癌的發展過程中，轉錄因子KLF5和MYC結合LINC00346啟動子區，并促進其表達；在胃癌中高表達的LINC00346主要定位在胞質中，并競爭性吸附miR-34a-5p，抑制miR-34a-5p對其下游靶基因（Notch1, AXL, 和CD44）的調控，最終導致了胃癌的惡化發展。LINC00346對胃癌細胞的促增殖和轉移的多效性作用提示LINC00346可作為胃癌的有效治療靶點。