pcr擴增的原理和步驟

PCR擴增是以單鏈DNA為模板，4種脫氧核糖核苷酸為底物，在模板末端有引物存在的情況下，用酶進行互補鏈的延伸，多次反復的循環能使微量的模板DNA得到極大程度的擴增。反應時先溶液加熱，使模板DNA在高溫下變性，雙鏈解開為單鏈狀態;然后降低溶液溫度，使合成引物在低溫下與其靶序列配對，形成部分雙鏈，稱為退火;再將溫度升至合適溫度，在熱穩定DNA聚合酶的催化下，以脫氧核糖核苷酸為原料，引物沿DNA模板延伸，形成新的DNA片段，該片段又可作為下一輪反應的模板，如此重復改變溫度，由高溫變性、低溫復性和適溫延伸組成一個周期，反復循環，使目的基因得以迅速擴增。因此PCR循環過程為三部分構成:模板變性、引物退火、熱穩定DNA聚合酶在適當溫度下催化DNA鏈延伸合成。