q225熒光定量PCR儀高級熱循環設置功能詳解

今天要給大家詳細講一講高級熱循環設置(Advanced Cycling)功能的使用方法。

q225默認的熱循環程序模板，支持最多6個步驟和100個循環，足夠滿足絕大部分用戶的使用需求。但是一些應用中，可能需要前幾個循環設置不同的反應條件，例如樣本為gDNA時升高前幾個循環的解鏈溫度，或為提高擴增特異性而升高前幾個循環的退火溫度等。這時候可以使用q225軟件中的高級熱循環設置功能。

后文的設置說明將以如下熱循環程序為例：第1-5個循環：98 ℃ 10s，65 ℃ 30s；

第6-40個循環：95 ℃ 5s，60 ℃ 15s。

第一步 啟動高級熱循環設置功能

在q225操作軟件菜單中選擇

溫度配置—》高級熱循環設置

打開后彈出高級熱循環設置對話框

勾選啟用高級熱循環設置

 
第二步 設置第1組循環

在左側的編輯區域輸入第1組循環，例如：

循環步驟數為2；

第一步解鏈：98 ℃ 10s；

第二步退火+延伸：65 ℃ 30s；

循環數為5；

在第2步采集熒光信號。

完成后點擊應用

 
第3步 加入第2組循環

單擊 插入 按鈕，增加一組新的循環

在左側的編輯區域輸入第2組循環：

循環步驟數為2；

第一步解鏈：95 ℃ 5s；

第二步退火+延伸：60 ℃ 15s；

循環數為35；

在第2步采集熒光信號。

完成后點擊應用

 
第4步 查看和編輯

在右側的表格中可以看到每一組熱循環的詳細配置

通過單擊左側的 插入 刪除 按鈕，來新增和刪除組

通過單擊右側表格，或者單擊左側組名兩邊的箭頭，來切換當前編輯的溫度組。

編輯完成后不要忘記點擊 應用 按鈕 使得更改生效哈

完成全部設置后，點擊 確認 按鈕

第5步 開始實驗

返回主界面，可以看到原本設置循環溫度和時間的區域，已經提示啟用了高級熱循環設置。

接下來就可以正常開始實驗啦~

高級熱循環功能

• 最多支持10組循環

• 每組循環支持最多6個步驟，循環數最多100

• 即總共支持最多1000個循環

另一種選擇

如果在40個循環前，想要額外增加3個循環進行預擴增，預擴增階段的溫度設置與循環階段的溫度設置不同，且預擴增階段不采集熒光（不參與Ct值計算）。

此時可以考慮在循環前步驟中開啟循環功能

勾選 循環前 框中的 開啟循環 選項

 
例如需要設置的溫度參數為

熱激活：95 ℃ 60s；

預擴增循環：3個循環，不采集熒光信號，98 ℃ 20s，65 ℃ 30s；

擴增循環：40個循環，95 ℃ 5s，60 ℃ 15s， 采集熒光。

則按照上圖進行設置，在開啟循環下方，設置循環步驟為2-3，共3循環。

上述兩個功能默認不開啟，如有需要請聯系技術支持為您開啟。