三氯生暴露斑馬魚中miR125b上調的上游調控機制研究

　　三氯生（TCS，5-氯-2 -[2,4-二氯苯氧基]苯酚）是一種抗菌劑，已被廣泛用于洗手液，家用清潔劑和牙科產品等。TCS對生物生長和發育具有不利影響，如影響生殖和內分泌紊亂。許多研究記錄了TCS對各種生物如魚，無脊椎動物和兩棲動物的急性或長期暴露毒性。有研究發現，長期的TCS暴露導致肝臟腫瘤并在小鼠中產生氧化應激。由于TCS是一種穩定的親脂性化合物，它優先在脂肪組織和肝膽中累積，因此在這些組織或器官中經常可以檢測到。 TCS在過表達CYP1A2，CYP2B6，CYP2C19，CYP2D6，CYP2C18， 葡糖醛酸（UGTs）和磺化轉移酶（SULTs）的HepG2細胞中被廣泛代謝。在斑馬魚中，TCS損害β-氧化轉錄物和脂質β-氧化基因的mRNA表達水平，包括pparα，cpt1，lpbe，cyp4a10和aco。非細胞毒性濃度的TCS可以通過降低脂肪細胞蛋白2，脂蛋白脂肪酶和脂聯素基因的表達來誘導人間充質干細胞脂質積累。然而，關于由TCS暴露誘導的特定microRNA（miRNA）和相關轉錄因子的信息很少。

圖 調控網絡，四個miRNA的保守性分析和表達位點以及dre-mir-125b靶基因的3’UTR結合位點

　　通過miRNA測序技術，研究人員確定了TCS暴露組和對照組之間失調的miRNAs。與對照組相比，這些失調miRNA中的miR-125b-5p在三個TCS暴露組中均差異表達。在癌癥研究中，miR-125b可以通過下調靶基因與腫瘤抑制基因相關聯。此外，一些研究已經檢測了miR-125b與小鼠和人類細胞系中代謝紊亂的關系。研究表明，miRNA在響應污染物暴露的情況下的表達變化來自下游基因的相應差異表達。這些報道主要集中在miR-125b的下游調控上，但是還沒有研究涉及相關的上游調控機制。

　　因此，本研究的具體目標是探討TCS暴露斑馬魚引起miR-125b表達變化的上游機制。盡管以前的研究發現了幾種能夠在哺乳動物細胞系中正調節miR-125b的因子，但miR-125b是否參與斑馬魚胚胎中的葡萄糖和脂質代謝仍然是不確定的。

　　研究結果顯示四個miRNA（miR-125b，miR-205，miR142a和miR-203a）在TCS暴露處理組和對照組之間差異表達；其功能主要涉及脂肪酸的合成和代謝。TCS暴露導致成熟miR-125b的上調，伴隨pri-mir-125b-1和pri-mir-125b-3在其3個pri-mir-125b中的一致改變。miR-125b的上調起源于涉及兩種上調前體的直接剪切過程，但不包括pri-mir-125b2。 pri-mir-125b-1和pri-mir-125b-3的表達增加是由兩個前體的啟動子的陽性對照元件的nfe212-和c/ebp-整合引起的。轉錄因子nfe212和c/ebpα的過表達啟動了miR-125b前體的啟動子活性。CpG島和Nfe212參與mir-125b-1和mir-125b-3的組成型表達。具有NFE2和Nfe212/MAF：NFE2結合位點的兩個啟動子區域pri-mir-125b-3，-487至-1bp ，pri-mir-125b1，-137至+14bp的活性高于其他區域，進一步表明轉錄因子Nfe212參與pri-mir-125b1和pri-mir 125b-3的調節。TCS的雌激素活性是由于其對GPER（一種新的膜受體）的作用，而不是經典的ERα和ERβ。這些結果在一定程度上解釋了miR-125b上調的上游調控機制，也為未來TCS暴露的機制研究提供了指導。