臨床試驗生物樣本的處理與保存規范

　　臨床試驗是新藥人體試驗的起始階段，即評價人體對于新藥的耐受性和安全性[1]。2003年國家食品藥品監督管理總局(CFDA)現更名為國家藥品監督管理局（NMPA）頒布了《藥物臨床試驗質量管理規范》(GCP)，其中規定研究者應獲得所在醫療機構或主管單位的同意，保證有充分的時間在方案規定的期限內負責和完成臨床試驗，從而保證臨床試驗高質量進行，得出真實、科學、可信的試驗結果。臨床試驗的規范程度直接關系到藥物研發的成敗[2-3]，在試驗的整個過程中生物樣本處理與保存環節中尤為重要，對試驗的結果的準確性起著關鍵的作用，也是保證檢測數據真實可靠和溯源的重要依據。結合本研究室近年開展的多個試驗項目，探討生物樣本處理與保存的重要性，從而建立科學的標本處理與保存的流程，旨在提高臨床試驗生物樣本的安全以及試驗結果的準確可靠。

　　1、臨床實驗標本處理前準備

　　1.1 管理制度：在《藥物Ⅰ期臨床試驗管理指導原則(試行)》中規定按照臨床試驗方案和標準操作規程(SOP)采集、處理和保存臨床試驗生物樣本。樣本容器的標識應有足夠的信息量，易于識別和具有唯一性。生物樣本轉運和保存應符合試驗方案和相關SOP的要求，保證其完整性和活性不受影響，并做好記錄。在試驗過程中，應保證生物樣本的標識性和可溯源性，建立樣本標識、移交和保存等相關記錄和樣本的儲存檔案。

　　嚴格的管理制度和完善的SOP是藥物臨床試驗順利實施的保證。管理的規章制度可以規定實驗室人員“應該做什么”，而“如何規范操作”是通過SOP具體闡述的，所以SOP必須具備可操作性，才能將規范化落到實處。

　　1.2 實驗室研究人員培訓[4]：實驗室研究人員責任心要強，要有扎實的技術理論基礎，且具有豐富實驗操作經驗，同時需經過 GCP 培訓，要有嚴謹的科學研究態度，在每一項臨床試驗前，要認真學習臨床試驗方案、生物樣本處理和保存的SOP，并遵循“赫爾辛基宣言”，保證臨床試驗的質量。充分明確工作職責，熟悉整個試驗流程，確保臨床試驗的準確性和安全性。

　　1.3 儀器設備：生物樣本的處理必須有儀器設備的保障，實驗室應配有-80℃超低溫冰箱、-20℃低溫冰箱、離心機、精密空調、制冰機、水浴鍋、移液器、氣體滅火裝置、溫濕控制系統等。管理人員應具有資質并經過操作培訓，儀器設備有清晰的標簽標明其生產日期和運行狀態，定期進行維護、檢測和校準，確保專人適時對試驗設施設備進行質量控制檢查，對儀器資料進行歸檔管理。實驗室設備安裝有報警系統，當溫控探頭記錄的溫度超過設定的溫度范圍時，系統即報警提示，并自動發送報警短信通知研究者，以便在第一時間采取相應措施。

　　1.4 材料與耗材：實驗室人員需仔細研究試驗方案，根據方案確保試驗中需要的儀器設備的正常運行，以及試驗記錄表格和試驗耗材準備齊全。需設計耐低溫的帶帽塑料試管標簽，標簽上應標有：項目名稱、劑量組或試驗周期、隨機號、時間點、是否備份等信息。經生物樣本管理員核對無誤后，將該標簽貼于耐低溫的帶帽塑料試管上，按一定順序進行擺放，雙人核對。

　　2、生物樣本的處理

　　2.1 生物樣本接收：生物樣本采集完成后，由生物樣本采集者或核對者及時將樣本遞交至實驗室，實驗室人員對生物樣本的編碼及數量進行核對和接收，樣本采集者或核對者與接收人員在移接記錄本上記錄時間并簽名。

　　2.2 生物樣本離心：實驗室人員離心前需對離心機的工作狀態按照臨床試驗方案的要求進行設置，并盡可能選擇合適高度的轉籃，以保證離心時采集管的管帽不摩擦離心機蓋的內壁，且不脫離管體。將生物樣本采集管放置在離心機內，離心試管需蓋好試管帽(若無合適高度的轉籃，可去除采集管的試管帽進行離心)。放置分離樣品時，注意要做到輕拿輕放，防止樣本濺入其他采集管中。

　　2.3 生物樣本分裝：離心結束后，應盡快取出標本，進行分離，此過程需要兩人核對并簽字，確保標本的編碼與分離后試管的編碼相對應。根據方案的要求，確定分裝的樣本量。核對內容包括周期(或劑量組)、受試者編號及時間點等。

　　2.4 特殊生物樣本的處理：根據試驗方案要求的不同：①試驗過程中需采取避光操作；②生物樣本中需額外增加使其穩定的溶液；③生物樣本從采集到儲存過程中需要采取冰浴措施。

　　3、生物樣本的保存與運輸

　　3.1 生物樣本儲存：分裝結束后，立即將樣本保存在臨床試驗方案規定的-20℃冰箱或-80℃冰箱里。檢測樣本和備份樣本需保存在不同的冰箱中，防止其中一個冰箱出現故障。離心時間、樣本采集到樣本存放時間均應嚴格按照臨床試驗方案要求進行。實驗室研究人員需記錄整個分離和保存過程，包括離心機編號、離心開始時間、離心后分取時間、放置到冰箱的時間、冰箱開始使用時間、結束時間、移液器開始使用時間、結束時間，操作者以及核對者簽字。

　　3.2 生物樣本的取出及運輸規范：①專人負責生物樣品的包裝、裝箱、交接并記錄全過程；②項目包裝運輸人員應與樣品管理員協商轉運；③從冰箱中取出凍存的生物樣品，研究者核對試驗方案編號、試驗藥物名稱、受試者編號、周期、劑量組、是否備份、種類(血、尿或者糞樣)、生物樣本的數目；④運輸工具為發泡塑料箱，其內放入適量干冰。(具體條件應依藥物在生物樣品中穩定性和運輸時間而定)，隨后放入溫度記錄儀，同時記錄記錄儀的編號、數量及放置時間；⑤生物樣本運送的外包裝應貼有生物樣品標記，注明到達單位和試驗藥物名稱，并用向上的箭頭表示不可倒置；⑥運輸前，填寫樣品轉運記錄、樣品接收記錄、樣品清單，并簽名、注明日期；⑦運輸員將生物樣品運輸到目的地后，接收人員應立即檢查生物樣品運輸的溫度情況，核對數目，填寫接收記錄。

　　接收人員應將接收記錄以傳真或其他方式交給本試驗室。

　　臨床試驗是一項在人體內進行的、用以回答與健康相關問題的科學研究工作。其包含種類很多，如新藥、新的醫療器械、新的治療與診斷技術應用的安全性與有效性的評價，以及新的臨床治療方法的探索與驗證等，是從動物試驗到臨床應用不可逾越的橋梁。而藥物臨床試驗是指任何在人體(患者或健康志愿者)內進行的藥物系統性研究，以證實或發現試驗藥物的藥理、臨床和/或其他藥效學方面的作用、不良反應以及藥物的吸收、分布、代謝及排泄，目的是確定試驗藥物的安全性和有效性。藥物臨床試驗一般分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期臨床試驗與藥物生物等效性試驗以及人體生物利用度試驗。藥物Ⅰ期臨床試驗是較為初步的臨床藥理學及人體安全性評價試驗，通過觀察人體對于新藥的耐受程度和藥代動力學，為臨床制定給藥方案提供依據。藥物臨床試驗流程包括：招募受試者、給藥、采集標本、生物樣本處理及保存、生物樣本的運輸等，需要各類專業人員，包括：醫生、護士、藥理學專業人員，還需要醫技人員。規范藥物臨床試驗生物樣本的處理及保存，是試驗數據得以準確的根本，需要通過人員培訓與設備完善來不斷提升生物樣本的處理與保存的質量。

　　實驗室研究人員作為生物樣本處理與保存的執行者，其及時、準確的處理標本可為試驗結果的分析或評價提供客觀、準確地依據。雖然近年來計算機和互聯網技術的不斷發展，電子數據采集技術具有的數據及時錄入、實時發現數據錯誤、加快研究進度等優勢[5]，在臨床試驗中被應用。但是，在藥物臨床試驗研究中，為了確保處理的每個生物樣本的準確性，以及試驗數據的真實、可靠，還必須對處理和保存的各個環節采取一系列的管理措施。試驗前，做好充分的準備，包括 儀器、耗材等；處理標本中，實驗室人員嚴格依從試驗方案要求、遵循SOP、嚴格執行核對，確保每個標本的準確。綜上所述，規范藥物臨床試驗中的生物樣本的處理與保存[6]，嚴格執行SOP，是保證藥物臨床試驗結果的準確性、可靠性的重要前提。