優化色譜質譜參數獲得理想的單抗輕重鏈分子質量（二）

圖 1. Q-Exactive 質譜采集的單抗輕鏈原始質譜圖（SID 代表源內碎裂能量，右上角的數字代表峰強度）

圖 2. Q-Exactive 質譜采集的單抗重鏈原始質譜圖（SID 代表源內碎裂能量，右上角的數字代表峰強度）

3.2 液相色譜梯度的優化

在樣品初步測試的過程中，我們使用 10 分鐘的色譜梯度進行樣品測試，得到的 LC-MS 色譜質譜圖如圖 3 所示，可以看到輕重鏈在同一個色譜峰中出峰，沒有實現完全的分離，不過從質譜圖中可以看到，色譜峰的前半部分為輕鏈，后半部分為重鏈，可以實現輕重鏈的分子質量測定。在不考慮時間限制的情況下，可以適當的延長色譜梯度，實現輕重鏈的完全分離，如圖 4 所示，輕重鏈的色譜洗脫梯度主要在乙腈相 20%–50%，延長該段時間到 5 分鐘，延長總色譜梯度時間到 15 分鐘，就可以實現輕重鏈的完全分離。

圖 3. Q-Exactive 質譜采集的 10 分鐘色譜梯度的單抗輕重鏈色譜質譜圖

圖4 Q-Exactive質譜采集的15分鐘色譜梯度的單抗輕重鏈色譜質譜圖

3.3 完整和脫糖 Herceptin 的輕重鏈分子量測定

基于以上的色譜和質譜條件優化，以 SID 為 30 eV 和色譜時間為 15 min，完整和脫糖 Herceptin 的輕鏈 LC-MS 以及原始質譜圖如圖 5 所示，相應的去卷積質譜鏡像圖如圖 6 所示，可以看到輕鏈的平均分子質量為 23438 Da；相應的重鏈 LC-MS 以及原始質譜圖如圖 7 所示，相應的去卷積質譜鏡像圖如圖 8 所示，可以看到脫糖重鏈的平均分子質量為 49149 Da，完整 Herceptin 的糖型主要存在形式為 2G0F 和 G0F+G1F。

圖 5. Q-Exactive 質譜采集的 15 分鐘色譜梯度的完整和脫糖 Herceptin 的輕鏈色譜質譜圖

圖 6. Q-Exactive 質譜采集的 15 分鐘色譜梯度的完整和脫糖 Herceptin 的輕鏈去卷積分子質量鏡像圖

圖 7. Q-Exactive 質譜采集的 15 分鐘色譜梯度的完整和脫糖 Herceptin 的重鏈色譜質譜圖

圖 8. Q-Exactive 質譜采集的 15 分鐘色譜梯度的完整和脫糖 Herceptin 的重鏈去卷積分子質量鏡像圖

4. 結論

本文基于 Q-Exactive plus 質譜平臺，主要優化了源內碎裂能量（SID）這一質譜參數和色譜洗脫梯度，從而實現了單抗輕重鏈有效的色譜分離和高信噪比的質譜測定，為藥物開發、生產和質檢過程中的單抗輕重鏈分析提供了直接的實驗方法，同時相似的質譜參數也可以應用到其它基于 Orbitrap 類型的質譜儀器上，為廣大的生物制藥客戶提供了單抗樣品輕重鏈快速分析的參考依據。