光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態實驗

實驗方法原理

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。

1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；

2）細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱為嗜堿性物質；

3）中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱為中性物質。

PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均分布蛋白質，由于蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環境中下在電荷增多，易與伊紅結合，染色偏紅；在偏堿性環境中負電荷增多，易與美藍或天青結合，染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制必須用優質甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致各種細胞染色反應異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。

用途：適合大多數細胞組織的染色，包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養細胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細胞凋亡的檢測等。

實驗材料 腫瘤細胞

試劑、試劑盒 甲醛二甲苯Gimsa染液Sorensen磷酸緩沖液香柏油蒸餾水

儀器、耗材 光學顯微鏡樹膠載玻片蓋玻片洗瓶離心機離心管

實驗步驟

一、試劑配制

1.  瑞氏染液配制

稱瑞氏染料0.1 g于研缽，少量多次加入AR級甲醇至完全溶解，后補充至60 ml棕色瓶密封保存，可加3 ml甘油防止揮發。

2.  吉姆薩染液配制

0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶內，56度，水浴90-120 min，當染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇，充分搖勻后過濾，棕色瓶室溫可保存一周。

二、染色

1.  收集細胞制成懸液后涂片、晾干。懸浮培養細胞離心收集。貼壁細胞可直接培養在載玻片上。組織取材需機械零散。

2.  固定：以甲醇固定10 min.

3.  液化精液2 000/ rmin 離心10 min，等滲鹽水洗3遍，涂片后自然干燥。

4.  臨用前，瑞、吉染液按10：1混合，染色30-60 s。

5.  加等量PBS（pH6.9），再染10 min。

6.  自來水沖洗，自然干燥后，即可鏡檢，也可直接香柏油兼做透明與封片。