凋亡中線粒體功能評價實驗

細胞

CMXRos 儲存液 PBS

1. 使用前用 DMSO 配置 1 mmol/L 的 CMXRos 儲存液，建議活細胞使用濃度 25~40 mol/L，后續將固定的細胞使用濃度為 50~200 mmol/L。為減少假象，熒光染料濃度應盡可能低。

2. 如是貼壁細胞，將細胞在蓋玻片上于培養皿中培養 24~48 小時。如是懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘沉淀約 5X10⁵ 細胞。二者均除去培養基，重置于含有染料探針的預熱培養基中，在組織培養條件下孵育細胞 15~45 分鐘。

3. 貼壁細胞用 pH 7.2 的 PBS 洗 1 次，將蓋玻片移至載玻片上，用裝配有校正濾器或相應激光的常規熒光或共焦顯微鏡直接觀測。如懸浮細胞，將細胞沉淀重懸于含 3% BSA 的 100 μl PBS 中，用細胞轉瓶 300 g 離心 5 分鐘，轉至載玻片上。固定載片后用熒光顯微鏡觀測。

4. 為了使樣品更穩定，可用新配制的 4% 甲醛-PBS 溶液室溫孵育 15 分鐘，將細胞固定于蓋玻片上或轉瓶。然后用 pH7.2 的 PBS 將細胞洗 3 次。

5. 此時可進一步用免疫細胞化學處理固定細胞，以測定細胞抗原的共表達，或同時用 TUNEL 方法檢測 DNA 片段大小。