利用重組工程技術標記鼠疫菌rpoS基因

摘要　目的:為便于研究鼠疫菌基因及其產物的功能,利用重組工程技術,建立一種表位標記細菌染色體基因的方法,以分析基因的表達規律。方法:將標簽序列合成于引物中,通過融合PCR法將標簽序列與抗性篩選基因連接,克隆到pB luescrip t載體,獲得模板載體pBS2MH。設計與待標記基因末端及其下游同源的引物,從模板載體上擴增標簽與抗性基因的融合模塊,獲得兩端帶同源區的PCR產物,電擊轉化鼠疫菌感受態細胞。在λ Red重組系統的輔助下,標簽和抗性基因重組到目的基因的下游,得到表位標簽與目的基因C末端融合的重組子。利用針對表位標簽的單克隆抗體進行Western blot分析,驗證C末端標記目的蛋白的表達。結果:成功構建了組氨酸標簽與抗性基因融合的質粒,以該質粒作為模板,擴增標記標簽盒,對鼠疫菌的rpoS基因進行了標記,利用針對組氨酸標簽的抗體能夠檢測到rpoS基因的表達。結論:基于重組工程的基因標記技術可以為基因功能研究提供一個有價值的研究手段。