雙向擴散試驗知識點

【知識點名稱】雙向擴散試驗

【進階攻略】該知識點需熟練掌握沉淀線的有無、形態和位置與抗原抗體之間的關系。

【知識點詳情】

雙向擴散試驗是讓抗原和抗體雙方都在瓊脂中各自向對方擴散，在比例恰當之處形成抗原抗體沉淀線，觀察這種沉淀線的位置、形狀以及對比關系，可對抗原或抗體進行定性分析。根據試驗形式也可分為試管法和平板法兩種。

（一）試管法

（二）平板法 是鑒定抗原抗體的最基本、最常見的方法之一。根據沉淀線的有無、形態和位置可作如下分析：

1.抗原或抗體的存在與否以及相對含量的估計　沉淀線的形成是根據抗原抗體兩者比例所致，沉淀線如果靠近抗原孔，則表示抗體含量較大；沉淀線如果靠近抗體孔，則表示抗原含量較大；不出現沉淀線則表明無對應的抗體或抗原或者抗原過量。

2.抗原或抗體相對分子量的分析　抗原或抗體在瓊脂內自由擴散，其速度受分子量的影響。分子量小者擴散快，反之則較慢。由于慢者擴散圈小，局部濃度則較大，形成的沉淀線彎向分子量大的一方；如果兩者分子量大致相等，則形成直線。

3.抗原性質的分析　兩種受檢抗原的性質可完全相同、部分相同或完全不同。三種情況在雙向擴散試驗中表現如下：兩條沉淀線互相吻合相連，表明抗體與兩個抗原中的相同表位結合而沉淀，兩個抗原相同；沉淀線呈部分相切，說明兩個抗原之間有部分相同；兩條沉淀線交叉而過，說明兩個抗原完全不同。

4.抗體效價的滴定　雙向擴散試驗是抗血清抗體效價滴定的常規方法。固定抗原的濃度，稀釋抗體；或者抗原和抗體雙方皆作不同的稀釋，經過自由擴散，形成沉淀線，以出現沉淀線最高的抗體稀釋度為該抗體的效價。

5.抗原或抗體純度鑒定　用混合抗原或抗體鑒定抗體或抗原，出現一條沉淀線說明待測抗原或抗體純，出現多條沉淀線說明不純。

雙向擴散試驗簡單易行，用途廣泛，但該技術靈敏度低，出現結果慢，不能精確定量，這些弱點在相當程度上限制了它的應用。