實驗室HIV檢測技術概述及進展

   艾滋病(AIDS)又稱獲得性免疫缺陷綜合征，是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一種免疫缺陷性疾病。HIV感染的診斷是艾滋病預防控制工作的重要組成部分，建立敏感實用的檢測方法對于監測、診斷或血液篩查，控制艾滋病的流行顯得尤為重要。以下本文就HIV的檢測技術現狀及進展做一綜述。

       1、HIV的感染機制及感染標志
    　
       HIV病毒侵入人體后，其表面糖蛋白gp120與細胞表面受體蛋白CD4以高親和力結合，吸附到宿主細胞上；gp120再與宿主細胞表面輔助受體相互作用，使病毒與宿主細胞膜更接近；gp41產生一系列構象變化，其N端的融合肽片段插入宿主細胞膜，導致病毒包膜與細胞膜的最終融合，病毒RNA進入細胞。在HIV感染后，最先能夠監測到病毒RNA、然后是p24抗原，最后是抗體。
  
       在感染后的10～14 d內，病毒RNA水平是呈指數上升，隨后下降并保持在持續穩定的水平上，進入HIV無癥狀期。p24抗原水平隨著病毒RNA水平的發展而發展，在急性感染期就可以出現，被認為是病毒復制的間接標志，但由于檢測方法的靈敏度不夠而使得其檢出時間要比RNA晚。從HIV感染到能夠檢測出HIV抗體這一時期，被稱作“窗口期”。在窗口期，能夠通過病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴細胞水平來確定HIV感染。CD4淋巴細胞水平隨著感染的發展而逐漸下降，當其在血液中細胞下降到200個/mL時，就會發生嚴重的免疫缺陷，患者就被確診為艾滋病。病毒RNA、p24抗原、HIV抗體和CD4淋巴細胞水平可以用來確 定HIV感染、檢測病情發展。
 
       HIV在病毒分類中屬逆轉錄病毒科慢病毒屬中的人類免疫缺陷病毒組。迄今為止，根據血清學反應和病毒核酸序列測定，全球流行的HIV可分為2 型：HIV 1型和HIV 2型。在HIV 1型內，根據編碼包膜蛋白的env基因和編碼殼蛋白的gag基因序列的同源性又進一步分為3個組：Ｍ組（主要組）、Ｏ組（外圍組）和Ｎ組（新組或非M非O組），Ｍ組內又可分為Ａ Ｊ10個亞型。在HIV 1型和HIV 2型之間，其核苷酸序列有45％的同源性，并且存在免疫交叉反應。應用免疫印跡法(West blot)可以將二者明確地區別開來。

       2、HIV感染的主要檢測方法
  
       目前檢測HIV的方法有100多種，總體來說可以分為抗體檢測和病毒檢測兩大類。病毒檢測包括細胞培養(病毒分離)、p24抗原檢測和病毒核酸檢測。早期對HIV的診斷主要是通過血清學試驗檢測抗HIV的抗體，間接地診斷HIV感染。近幾年，分子生物學方法不斷被應用到HIV的檢測中，HIV的實驗室診斷方法取得了很大的進展，核酸檢測已經成為了HIV實驗室診斷的發展方向。
  
       抗體通常是在感染后3～8周能夠被檢測出來。目前，大多應用雙抗原夾心法，這種方法具有很好的靈敏性和特異性。抗體檢測由初篩和確認試驗組成，初篩試驗呈陽性的必須進行確認試驗。酶聯免疫吸附分析(ELISA)方法有一定的靈敏度，且操作簡單、快速，適合對大量樣品的檢測。因此，是目前臨床通用的初篩檢測方法。國際上有3種確認試驗方法，包括免疫印跡試驗、條帶免疫試驗及免疫熒光試驗，目前以免疫印跡試驗最為常用。
  
       在窗口期，病毒抗體不能被檢出，但可以檢測到病毒相關抗原或分離病毒。抗原能夠在個體感染后先于血清轉化2～18 d被檢測到。因此，在血清轉化期通過檢測p24抗原有著很大的優勢，可以作為早期輔助診斷HIV感染的一種方法。
   
       病毒培養是檢測HIV感染最精確的方法。一般采取培養外周血單個核細胞(PBMC)的方法進行HIV的診斷。
      
       病毒核酸檢測通常是通過檢測HIV RNA水平來反映病毒載量，具有很高的靈敏度，使用適時熒光聚合酶鏈反應(PCR)技術，能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。病毒核酸檢測方法可用于HIV的早期診斷，如窗口期輔助診斷、病程監控、指導治療方案及療效測定、預測疾病進程等。目前常用的測定方法有逆轉錄PCR實驗(RT PCR)、核酸序列擴增實驗(NASBA)、分支DNA雜交實驗(bDNA)等。使用高靈敏度的適時熒光PCR技術，能夠在HIV感染的前2周檢測到病毒核酸。